提取生物大分子的基本思路是什麼？對於dna的粗提取而言

1樓：聽風

提取生物大分子的基本思路是將被分離的生物大分子與其他物質分開，並加以純化。

在dna的粗提取實驗中，其原理是dna在0.14mol/l的氯化鈉溶液中溶解度最低，而蛋白質此時的溶解度高的特點，可以使dna與蛋白質分離，形成沉澱析出，通過過濾，得到粗提取的濾出物dna。再利用dna不溶於酒精，但細胞中的其他物質可溶於酒精的特點，進一步提取出含雜質較少的dna。

2樓：小妖_的眼睛

首先最重要的一點是保證大分子物質不變性,否則分離純化的工作將毫無意義,對於分離dna，如果是從生物體中直接提純,要注意提取溶液的濃度,根據你所想要的a型或者b型來選配鹽水,ph當然很重要,稍微偏鹼性有利於提純.如果從rna和dna的混合物種分離,直接使用弱鹼性的緩衝液進行電泳就行.

此外,就是要提取週期短.週期越長提取效果越差

步驟儘量簡潔.過於繁瑣的步驟會讓生物大分子活性降低,尤其提取酶的時候尤其重要

當然一定的純度也是必須的考慮因素,根據實驗需要,提純也需要不同的純度,自然方法有差異

提純過程中的副產物也是需要考慮的因素.要保證他們不能影響提純工作的進行

需要注意生物大分子的特性

①在水和各種有機溶劑中的溶解性。

②在不同溫度、ph 值和各種緩衝液中生物大分子的穩定性。

③固態時對溫度、含水量和凍干時的穩定性。

④各種物理性質：如分子的大小、穿膜的能力、帶電的情況、在電場中的行為、離心沉降的表現、在各種凝膠、樹脂等填料中的分配係數。

⑤其他化學性質：如對各種蛋白酶、水解酶的穩定性和對各種化學試劑的穩定性。

⑥對其他生物分子的特殊親和力。

如何提取dna粗提和精提的方法

3樓：聽風

一、dna提取（粗提取）

1、酚抽提法：先用蛋酶k、sds破碎細胞，消化蛋白，然後用酚和酚-氯dna大小為100-150kb

2、甲醯胺解聚法：破碎細胞同上，然後用高濃度甲醯胺解聚蛋白質與dna的結合，再透析獲得dna可得dna200kb左右。

3、玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪於乙醇上，然後用帶鉤或u型玻璃棒在介面輕攪，dna沉澱液繞於玻棒。生成dna約80kb。

4、異丙醇沉澱法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子rna（在異丙醇中可溶狀態）

5、表面活性劑快速製備法：用triton x-100a或np40表面活性劑破碎細胞，然後用蛋白酶k或酚去除蛋白，乙醇沉澱或透析。

6、加熱法快速製備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然後離心後取上清，可用於pcr反應。

7、鹼變性快速製備：先用naoh作用20分鐘，再加hci中和，離心後取上清，含少量dna。

二、dna的濃縮（精提取）

1、固體聚乙二醇（peg）濃縮：用透析袋外敷peg至合適量。

2、丁醇抽提濃縮：dna溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇，但dna不會。因此重複幾次可顯著減少dna體積。

3、乙醇或異丙醇沉澱：（1）需要陽離子鹽的存在，naac最常用,nacl對含sds樣品好，nh4ac去除dntp好。picl沉澱rna好，但不能用於反轉錄前。

（2）沉澱溫度與時間；0℃一4℃，12000g，10分鐘，小於100bp dna需超速離心。

4、精胺沉澱法：與dna結合後使dna結構凝縮沉澱，需在無鹽或低鹽溶液。