1樓：匿名使用者
原核表達？ 是表達不出來還是全在包涵體裡面？
說詳細一點。
沒有成功表達是沒有表達還是全在包涵體裡上清沒有？
iptg濃度不重要，時間也不重要。
2樓：汲夢絲
pgex特點就是帶有gst標籤，可以增加目的蛋白的溶解度，別的沒什麼特點，屬於大眾型載體，目前也較常使用。你說的沒有表達有沒有做全菌的sds-page啊，不管是不是形成包涵體全菌電泳都應該有條帶，至於形不形成包涵體就取決於你的iptg濃度和誘導溫度了，iptg越低，溫度越低可溶性越好，我們曾做過0.1的iptg，4度誘導過夜的。
因為pgex載體是不能變性復性的，因為gst標籤的活性會發生改變。如果是全菌都沒有表達，首先檢查是不是你插入序列的問題，排出後看看是不是稀有密碼子的問題，真核基因在原核細胞中表達會受到大腸桿菌稀有密碼子的影響，網上有分析軟體。如果稀有密碼子比較多可以使用rosetta菌株來表達，應該能出來的，只要不是你序列的問題，沒有出不來的蛋白，只是溶不溶，有沒有活性的問題。
質粒圖譜怎麼看
3樓：匿名使用者
第一步：首先看ori的位置，瞭解質粒的型別（原核/真核/穿梭質粒）
ori的箭頭指複製方向，其他元件標註的箭頭多指轉錄方向（正向）。
第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什麼篩選標記：
（1）ampr：水解β-內醯胺環，解除氨苄的毒性。
（2）tetr ：可以阻止四環素進入細胞。
（3）camr：生成氯黴素羥乙醯基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸轉移酶，使g418（卡那黴素衍生物）失活。
（5）hygr：使潮黴素β失活。
第三步：看多克隆位點（mcs）。它具有多個限制酶的單一切點，便於外源基因的插入。
如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標誌基因的失活，而便於篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源dna插入片段大小。質粒一般只能容納小於10kb的外源dn**段。一般來說，外源dn**段越長，越難插入，越不穩定，轉化效率越低。
第五步：是否含有表達系統元件，即啟動子－核糖體結合位點－克隆位點－轉錄終止訊號。這是用來區別克隆載體與表達載體。
克隆載體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用那種載體，還是要以實驗目的為準繩。
求原核蛋白表達過程，尤其是鎳柱那一塊（his與gst的詳細步驟）還有蛋白質的復性，總之越詳細越好，
4樓：匿名使用者
你這個問題不是幾bai句話能du
回答的 但是zhi既然你提到了
鎳柱純dao化 那最簡單的方法就是
請問有人知道基因克隆載體中PGEX的特點嗎
pgex特點就是帶有gst標籤，可以增加目的蛋白的溶解度，別的沒什麼特點，屬於大眾型載體，目前也較常使用。你說的沒有表達有沒有做全菌的sds page啊，不管是不是形成包涵體全菌電泳都應該有條帶，至於形不形成包涵體就取決於你的iptg濃度和誘導溫度了，iptg越低，溫度越低可溶性越好，我們曾做過0....
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