1樓:匿名使用者
pgex特點就是帶有gst標籤,可以增加目的蛋白的溶解度,別的沒什麼特點,屬於大眾型載體,目前也較常使用。你說的沒有表達有沒有做全菌的sds-page啊,不管是不是形成包涵體全菌電泳都應該有條帶,至於形不形成包涵體就取決於你的iptg濃度和誘導溫度了,iptg越低,溫度越低可溶性越好,我們曾做過0.1的iptg,4度誘導過夜的。
因為pgex載體是不能變性復性的,因為gst標籤的活性會發生改變。如果是全菌都沒有表達,首先檢查是不是你插入序列的問題,排出後看看是不是稀有密碼子的問題,真核基因在原核細胞中表達會受到大腸桿菌稀有密碼子的影響,網上有分析軟體。如果稀有密碼子比較多可以使用rosetta菌株來表達,應該能出來的,只要不是你序列的問題,沒有出不來的蛋白,只是溶不溶,有沒有活性的問題。
2樓:匿名使用者
是pgex系列表達載體吧?
pgex特點就是帶有gst標籤,可以增加目的蛋白的溶解度。另外pgex載體是不能變性復性的,因為gst標籤的活性會發生改變。
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