1樓：墨汁諾
這樣理解，把編碼鏈本身的5』→3』的方向規定為正方向，也就是模板鏈的3'>5'是正方向了，而模板鏈的5』→3』的方向 也就是為負方向了。
上游鏈就是結合在模板鏈3』端，也就是在正方向的上游，其延伸方向和正方向相同；而下游鏈結合在編碼鏈5』端，也就是正方向的下游，其延伸方向和正方向相反了。
上游引物就是和要擴增基因片斷上游序列結合的引物（引物就是單鏈寡聚核苷酸，基因擴增需要從引物開始），同理，下游引物指與目的基因片斷下游序列結合者。
2樓：三秒想一個暱稱
5'端如果算序列的頭，3'端算序列的尾。
dna 聚合酶只能從5'端向3'端新增脫氧核糖核苷酸。那麼在dna正鏈上結合的引物（圖中dna單鏈的上面一條鏈），必然在dna雙鏈分子的下游（是雙鏈的下游），所以稱為下游引物；在dna負鏈上結合的引物，必然在dna雙鏈分子的上游，所以稱為上游引物（我個人是這麼理解的）
所以在引物設計的時候，下游引物同基因序列是反向互補的，而上游引物和基因的序列是一致的。
正向引物(forward primer,也稱上游引物)是沿著負鏈進行不間斷延長的。
反向引物(reverse primer,也稱下游引物):是沿著正鏈進行不間斷延長的。
一般獲得的基因序列都是dna的正鏈。
3樓：匿名使用者
dna複製總是從5』端到3』端，因為dna聚合酶只能往3』端加核苷酸。所以誰先複製誰就是上游，往後的就是下游，上游下游是個相對概念，是某一個序列/鹼基相對於另一個序列/鹼基而言。底下原始鏈是3'-5'，所以引物加上去相當於是前導鏈，是連續複製的；而上面的原始鏈是5'-3'，所以引物加上去相當於是後隨鏈，是半不連續複製。
4樓：晨鐘
上游引物是目的序列本身，下游序列是目的序列的反向互補。dna聚合酶只能往3'端加核苷酸，引物序列的一般寫法都是5'-3'，dna兩條鏈是反向互補的，所以上游引物是序列本身，只能擴增你所說的下面那條鏈；而下游引物是目的序列的反向互補，從另一端擴增dn**段，就是你所說的上面那條鏈，就是下游序列。不知道這樣可不可以看懂。
做菌落pcr時的上下游引物是誰的？是目的片段pcr是的上下游引物還是載體的上下游引物？
5樓：匿名使用者
都可以bai。最排除背景的du方法是
用交叉zhi引物做菌p，也就是上游引物dao是載體版引物，下游引物權是目的基因下游引物，或者上游引物是目的基因上游引物，下游引物是載體下游引物，這樣可以最大限度排除背景，只要能擴出來的基本上就可以肯定是重組子了
6樓：匿名使用者
都可以。只要使用你自己基因的引物就可以了，沒有區別。一般載體有一個通用引物，沒有必要合成。
7樓：匿名使用者
一般是目的片段pcr 不排除特殊情況
pcr出現只用上游引物就能引出片段的情況！怎麼解釋
8樓：飛雪之靈
你要看看是不是你的上游引物能在你的模板的下游反向結合，然後兩個上有引物拉出的中間的一段。也就是說，出現了錯配。
你在用pp5設計引物時，一定要注意是否出現了錯配、錯配可能會拉出的條帶大小。有時候pp5會漏判出現錯配的情況（這個我發現過很多次了）。如果大小類似，建議你測序驗證。
建議重新設計引物。
9樓：***
可能是隨機擴增吧。
看看產物另一端有沒有相似序列。
你的引物長度？目的片段長度？擴增產物長度？
10樓：
首先，只有測序結果能夠反映引物的擴增特異性，採用軟體**的擴增特異性最終需要實驗來檢驗，所以說你選擇primer5.0出現這樣的問題是完全可以理解的。
其次，用一條引物是可以擴增出產物的，而且該產物和目的產物也有一定的聯絡，起碼開始的一段序列它們是相同的。但是必須注意：你用一條引物擴增出的產物有可能比你的目的產物長，也有可能是短，第三種可能才是你的目的條帶。
並不能保證你擴增出來的就是你的目的產物。
為什麼設計pcr引物時，後面那條引物設計出來後要反轉？
11樓：匿名使用者
兩條引物針對兩條鏈設計，因為擴增的方向都是5『-3』。每條引物針對一條鏈，這樣整個pcr反應就兩條鏈都合成出來了。所以設計的時候，第二條引物是用互補鏈為模板設計的，所以要反轉。
用引物設計軟體設計，很容易就搞清楚原理了，也不容易出錯。
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