1樓：清華生物
t4噬菌體dna連線酶
外源dna與載體分子的連線就是dna重組，這樣重新組合的dna叫做重組體或重組子。重組的dna分子是在dna連線酶的作用下，有mg2 、atp存在的連線緩衝系統中，將分別經酶切的載體分子與外源dna分子進行連線。dna連線酶有兩種：
t4噬菌體dna連線酶和大腸桿菌dna連線酶。兩種dna連線酶都有將兩個帶有相同粘性末端的dna分子連在一起的功能，而且t4噬菌體dna連線酶還有一種大腸桿菌dna連線酶沒有的特性，即能使兩個平末端的雙鏈dna分子連線起來。但這種連線的效率比粘性末端的連線率低，一般可通過提高t4噬菌體dna連線酶濃度或增加dna濃度來提高平末端的連線效率。
t4噬菌體dna 連線酶催化dna 連線反應分為3 步：首先，t4 dna 連線酶與輔因子atp形成酶-atp複合物；然後，酶-atp複合物再結合到具有5』磷酸基和3』羥基切口的dna上，使dna腺苷化；最後產生一個新的磷酸二酯鍵，把切口封起來。連線反應通常將兩個不同大小的片斷相連。
因為dn**斷有兩個端點，所以切割時出現兩種可能，一種是單酶切，另一種是雙酶切，這兩種酶切方法在基因工程操作中都經常用到。對於單酶切來說，載體與供體的末端都相同，連線可以在任何末端之間進行，這樣就導致了大量的自連線產物。為了減少自環的高本底，可對載體進行5』除磷酸處理，原理是連線酶只能連線dn**斷的3』oh末端與5』端，所以除磷後載體不會自環。
一旦有外源片斷插入時，由外源片斷提供5』端就能與載體進行連線。通過這種方法可大大減少由載體的自
環造成的高本底。對於雙酶切來說，無論載體與供體同一片段上都有不同的末端，這樣就避免了載體與供體的自環，能使有效連線產物大大增加。雙酶切的另一個特點是能將供體分子定向連線到載體上。
連線反應的溫度在37℃時有利於連線酶的活性。但是在這個溫度下粘末端的氫鍵結合是不穩定的。因此採取折中的溫度，即12-16℃，連線12-16h（過夜），這樣既可最大限度地發揮連線酶的活性，又兼顧到短暫配對結構的穩定。
taq dna酶擴增的pcr產物，其dna雙鏈前後末端都有一個遊離的a鹼基，可以與pgem-t easy vector 末端遊離的t鹼基互補形成環狀重組t質粒。
2樓：飛雪之靈
平末端也可以用dna連線酶連線，不過效率很低。
3樓：匿名使用者
不能，但加peg就有可能了
還可用t4dna連線酶，效率不高，提高效率要注意很多因素。
4樓：別的不管先把名兒搞得長長長長長的
是黏性末端吧?應該是不能的.
5樓：匿名使用者
粘性末端不行 平末端可以~~~
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