基因組DNA製備過程中提取緩衝液有哪些成分,作用是什麼

時間 2021-05-06 04:41:40

1樓:長春北方化工灌裝裝置股份****

主要成分是:nacl,tris-hcl(ph=8),edta(ph=8),sds.nacl,tris-hcl主要是調節溶液的ph,維持一定的離子濃度.

edta主要是二價金屬離子的螯合劑,使影響dna的dna酶中的鈣離子和鎂離子和edta結合,使酶失去活性,有利於提取完整dna;sds主要是和蛋白質結合,使其變形沉澱,從而利於dna的提取,減少和清除帶白質雜質!

基因組dna的提取緩衝液的成分有哪些

2樓:北京索萊寶科技****

提取dna緩衝液(ctab法):2% ctab(w/v),100 mmol/l tris-hci ph 8.0,20 mmol/l edta ph 8.

0,1.4 mol·l-1 nacl,2% pvp (滅菌後加入2% pvp ,使之充分溶解).在研磨葉片前加入1%(v/v)ß-巰基乙醇.

在儲存或抽取dna過程中,一般採用什麼緩衝液?

3樓:北京索萊寶科技****

在基因操作實驗中,選擇緩衝液的主要原則是考慮dna的穩定性及緩衝液成分不產生干擾作用。磷酸鹽緩衝系統(pka=7.2)和硼酸系統(pka=9.

24)等雖然也都符合細胞內環境的生理範圍,可作dna的儲存液,但在轉化實驗時,磷酸根離子的種類及數量將與ca2+產生ca3(po4)2沉 澱;在dna反應時,不同的酶對輔助因子的種類及數量要求不同,有的要求高離子濃度,有的則要求低鹽濃度,採用tris-hcl(pka=8.0)的緩衝 系統,由於緩衝液是trish+/tris,不存在金屬離子的干擾作用,故在提取或儲存dna時,大都採用tris-hcl系統,而te緩衝液中的 edta更能穩定dna的活性.

植物基因組dna一般取植物的哪個部分提取最好,是根

4樓:佳尼斯

一般是根,例如水稻和擬南芥,都是研磨提取根部的dna,可以在-80攝氏度下儲存較長時間。根部提取dna可以減少本身rna的汙染。

dna上樣緩衝液和rna上樣緩衝液可以通用麼

5樓:北京索萊寶科技****

dna上樣

緩衝液bai

和rna上樣緩衝液可以du通用。

因為zhidna和rna鏈上的鹼基都基本

dao一致版

。而這兩種上權樣緩衝液中含有的染料是二甲苯青和溴酚藍,都可以與其鹼基結合,跑出條帶。

但是,如果使用dna上樣緩衝液,裡面會夾雜一些rna酶,這些酶有可能會影響到實驗結果。使用前需要將rna酶處理掉。

基因組dna提取中細胞裂解液怎麼配製

6樓:北京索萊寶科技****

裂解方法包括化學裂解、酶裂解和機械裂解.化學裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法,通常會很少使dna 斷裂.這兩種方法(包括sds 和溶菌酶處理等)提取純化dna中常用的方法.

機械裂解可以更均一的裂解細胞,同化學裂解相比,機械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性.機械處理可以更劇烈和全面的裂解細胞,但也會造成dna 的斷裂.

一、機械裂解法主要有以下兩中:

1.熱休克(thermal shock),既反覆凍溶法,是一種常用的機械裂解方式比,通常由冷凍和解凍兩部分組成(freezing and thawing),.原理:由於細胞內冰粒形成和剩餘細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結構破碎.

冷凍通常在液氮或-20°c冰上進行,解凍可以在37、50、65 或100℃水浴中進熱休克比化學裂解溫和,但是很有效,有資料表明用熱休克和溶菌酶與sds的方法獲得了90%的細胞裂解率.

2.超聲波處理(ultrasonication)既利用超聲加熱的方法,把細胞破碎.但這種處理會導致dna 的斷裂,所以加熱不宜過劇烈,要設定好超聲時間和間隙時間,一般超聲時間不超過5秒,間隙時間最好大於超聲時間,這些都有利於保護酶的活性.bead-beating 也是常用的機械處理方式,有報道指出bead-beating 比熱休克和化學裂解的細胞裂解效果更好 雖然dna產量較高,但通常得到的dn**段較小.

二、 化學裂解和酶裂解法(在提核酸時聯合使用)

主要是裂解液處理法,細胞裂解液的主要目的有以下幾種:(1)利用去汙劑破壞脂質雙分子層,破裂細胞;(2)溶解蛋白;(3)蛋白變性使其穩定;(4)抑制蛋白酶活性.

主要根據不同的目的,裂解液的組成有所不同,主要有提取核酸和蛋白兩中.在提取rna或dna時,我們主要是要充**解細胞,得到更多的核酸;如果我們的目的是蛋白,那要根據蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液,在提取蛋白後,再根據實驗需要復性蛋白等.以下是細胞裂解中常用試劑和其作用:

50 mm tris-hcl ph 7.4(緩衝體系),150 mm nacl(等滲體系),1 mm pmsf (強大的蛋白酶抑制劑),1 mm edta(變性劑和穩定劑),5 μg/ml aprotinin(蛋白酶抑制劑),5 μg/ml leupeptin(蛋白酶抑制劑),1% triton x-100(破壞細胞),1% sodium deoxycholate(中度變性劑和蛋白溶解劑),0.1% sds(強變性劑和蛋白溶解劑).

7m 尿素,2m硫脲(可以提高膜蛋白的融解),蛋白酶k等.

7樓:青舸飛弦

有專門賣的細胞裂解液,需要新增蛋白酶抑制劑

提取基因組dna的方法有哪些?各有何優缺點?

8樓:

1、苯酚氯仿抽提法

優點是採用了實驗室常見的試劑和藥品,做起來成本比較低廉。

缺點是由於使用了苯酚、氯仿等試劑,毒性較大,長時間操作對人員健康有較大影響,而且核酸的**率較低,損失量較大,由於操作體系大,不同實驗人員操作重複性差,不利於保護rna,很難進行微量化的操作。

2、離心柱法

離心柱法dna提取它的優點是比傳統的酚氯法提取的純度高,有利於rna保護,而且能進行微量操作,以其低廉的**和相對便捷的操作,漸逐取代了傳統dna提取方法,被高校科研所等市場普遍接受。

離心柱法dna提取的缺點是需要較多的樣本,耗材多,對於珍稀樣本無能為力,特別是在法醫、考古等領域顯得力不從心。

同時離心柱法dna提取需要反覆離心,不便於高通量、自動化操作,與現代生物學實驗的高通量、自動化要求格格不入,特別是在基因診斷、疾病檢測、轉基因檢測等領域,離心柱法dna提取需要大量的操作人員及儀器裝置。

當面對突發疫情時,更是需要有高通量的dna提取裝置與方法才能更有效準確的監測疫情、控制疫情。

3、磁珠法

磁珠法是奈米科技與生物技術的完美結合,具有其他dna提取方法無法比擬的優勢,主要體現在:

(1)能夠實現自動化、高通量操作,配合96孔的核酸自動提取儀,在以往做一個樣品的提取時間內可同時實現對96個樣品的處理,效率直接提高96倍,滿足了當前生物學高通量操作的要求,使得在大規模疫情爆發時能夠進行快速篩查原因,這個優點是其他方法難以趕超的。

(2)操作簡單、用時短,整個提取流程只有裂解、結合、洗滌、洗脫四步短時間內即可完成。

(3)安全無毒,不使用傳統方法中的苯、氯仿等有毒試劑,對實驗操作人員的傷害少,保護了實驗人員的身體健康。

(4)磁珠與核酸的特異性結合使得提取的核酸純度高、濃度大。

(5)靈敏度高,適合法醫樣本等痕量dna提取。

9樓:北京索萊寶科技****

dna提取主要是ctab方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學方式如異硫氰酸胍法、鹼裂解法。生物方式:

酶法。根據核酸分離純化方式的不同有;矽質材料、陰離子交換樹脂等。

10樓:昊鑫生物

提取基因組dna和細胞核dna是不同的方法提取細胞核要先把細胞破碎分離出細胞核,要在甘油或其他保護劑中進行sds十二烷基磺酸鈉:可破壞細胞膜、核膜,並使組織蛋白與dna分離catb是一種抽提液,破壞細胞膜的~具體忘了~dna不溶於異丙醇,異丙醇可以析出dna,產生白色絮狀沉澱,用槍頭挑出就可以了

當然現在都按不同需求購買試劑盒了。

在提取基因組dna的時候還有哪些雜質,如何除去

11樓:北京索萊寶科技****

蛋白質 用蛋白酶k消化蛋白質,sds(20%)蛋白質變性用氯仿抽提後可以去除蛋白質

多糖類物質 用氯仿抽提可以去除

rna 用rna降解酶可以去除

12樓:匿名使用者

有專門的血清dna提取試劑盒,提取方法簡便,效率高。

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