1樓:北京索萊寶科技****
做好血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗的方法:
電泳時,電壓應控制在 110 ~ 140v ,不能過高,若電壓太高,產熱量大,則蛋白質標本會破壞,並且電壓高則帶電顆粒移動速度快,分離效果不理想。
醋酸纖維素薄膜在電泳前,一定要在緩衝液中浸透,否則有礙電泳分離,最好是浸泡過夜,效果最佳。
點樣時樣品一定要點在無 光澤面,否則很難吸入,點樣量 不宜過多(血清樣品最適宜 3μl )。其原因是醋酸纖維素薄膜承受蛋白質有限。量過多則分子量相近的物質相互爭奪遷移而重疊,影響結果觀察。
電泳開始後,不能再取放薄膜,以防觸電。如必需進行,要先關閉電源。
影響電泳的主要因素:
電泳介質 ph 值的影響 : 對於蛋白質和氨基酸等兩性分子,電泳介質的 ph 值影響蛋白質的電離情況,即可決定蛋白質的帶電量 (q) 。 ph 值小於等電點,分子帶正電荷,向負極泳動,如果 ph 大於等電點,分子帶負電荷,向正極泳動。
ph 值偏離等電點越遠,分子所帶淨電荷越多,其泳動速度越快。當緩衝液 ph 等於其等電點時,分子處於等電狀態,不移動。由於血清蛋白質的等電點多在 ph4 ~ 6 之間,因此,分離血清蛋白常用 ph 8.
6 的巴比妥緩衝液或三羥甲基氨基甲烷 (tris) 緩衝液。
緩衝液的離子強度 : 離子強度低,電泳速度快,分離區帶不易清晰;離子強度高,電泳速度慢,但區帶分離清晰。如離子強度過低,緩衝液的緩衝量小,不易維持 ph 的恆定;離子強度過高,則降低蛋白質的帶電量 ( 壓縮雙電層 ) 使電泳速度減慢。
所以常用離子強度為 0.02 ~ 0.2 之間。
電場強度的影響 : 電場強度和電泳速度成正比關係。電場強度以每釐米的電勢差計算,也稱電勢梯度。
如紙電泳的濾紙長 15cm ,兩端電壓 ( 電勢差 ) 為 150v ,則電場強度為 150 / 15=10 v / cm ,電場強度愈高,則帶電粒子的移動愈快。 隨著電場強度的增高,電流強度增加,產熱也增多。產熱的不良後果是:
① 引起水的蒸發,改變溶液 ph 及離子強度; ② 引起介質溫度高,可使蛋白質變性。因此電泳必須控制電壓在一定範圍之內,當進行高壓電泳時,必須裝備有效的冷卻裝置。
電滲 : 在電場中,由於多孔支援物吸附水中的離子使支援物表面相對帶電,在電場作用下,溶液就向一定方向移動,此種現象稱為電滲。如紙上電泳所用的濾紙纖維素帶有負電荷;瓊脂糖電泳中,所用的瓊脂糖由於大量硫酸根的存在也帶有負電荷,它們使水感應產生水合氫離子 (h+3o) 。
在外電場的作用下,水向負極移動。如果被測定樣品也帶正電荷,則移動更快;如果被測定樣品帶負電荷,則移動減慢。所以電泳時,顆粒泳動所表現的速度決定於顆粒本身的泳動速度和溶液的電滲作用。
因此在選用支援物時,應儘量避免高電滲作用的物質。
2樓:匿名使用者
根據血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳原理及多年來的實驗教學經驗,對該實驗操作中的主要環節做分析、**,找出影響血清蛋白質區帶分離的主要因素和解決方法
血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳的實驗分析怎樣寫?
3樓:匿名使用者
可以依照以下幾個bai線索du分析:
1,薄膜本身的zhi質量問題(塗層dao不均勻等),專2,點樣技術問題屬,
3,電壓電流控制問題,
4,樣品本身是否有降解、汙染;
5,實驗過程其他可能影響結果的問題,如平衡時間、浸泡時間、染脫色透明時間等。。
如何做好血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗
4樓:北京索萊寶科技****
做好血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗的方法:
電泳時,電壓應控制在 110 ~ 140v ,不能過高,若電壓太高,產熱量大,則蛋白質標本會破壞,並且電壓高則帶電顆粒移動速度快,分離效果不理想。
醋酸纖維素薄膜在電泳前,一定要在緩衝液中浸透,否則有礙電泳分離,最好是浸泡過夜,效果最佳。
點樣時樣品一定要點在無 光澤面,否則很難吸入,點樣量 不宜過多(血清樣品最適宜 3μl )。其原因是醋酸纖維素薄膜承受蛋白質有限。量過多則分子量相近的物質相互爭奪遷移而重疊,影響結果觀察。
電泳開始後,不能再取放薄膜,以防觸電。如必需進行,要先關閉電源。
影響電泳的主要因素:
電泳介質 ph 值的影響 : 對於蛋白質和氨基酸等兩性分子,電泳介質的 ph 值影響蛋白質的電離情況,即可決定蛋白質的帶電量 (q) 。 ph 值小於等電點,分子帶正電荷,向負極泳動,如果 ph 大於等電點,分子帶負電荷,向正極泳動。
ph 值偏離等電點越遠,分子所帶淨電荷越多,其泳動速度越快。當緩衝液 ph 等於其等電點時,分子處於等電狀態,不移動。由於血清蛋白質的等電點多在 ph4 ~ 6 之間,因此,分離血清蛋白常用 ph 8.
6 的巴比妥緩衝液或三羥甲基氨基甲烷 (tris) 緩衝液。
緩衝液的離子強度 : 離子強度低,電泳速度快,分離區帶不易清晰;離子強度高,電泳速度慢,但區帶分離清晰。如離子強度過低,緩衝液的緩衝量小,不易維持 ph 的恆定;離子強度過高,則降低蛋白質的帶電量 ( 壓縮雙電層 ) 使電泳速度減慢。
所以常用離子強度為 0.02 ~ 0.2 之間。
電場強度的影響 : 電場強度和電泳速度成正比關係。電場強度以每釐米的電勢差計算,也稱電勢梯度。
如紙電泳的濾紙長 15cm ,兩端電壓 ( 電勢差 ) 為 150v ,則電場強度為 150 / 15=10 v / cm ,電場強度愈高,則帶電粒子的移動愈快。 隨著電場強度的增高,電流強度增加,產熱也增多。產熱的不良後果是:
① 引起水的蒸發,改變溶液 ph 及離子強度; ② 引起介質溫度高,可使蛋白質變性。因此電泳必須控制電壓在一定範圍之內,當進行高壓電泳時,必須裝備有效的冷卻裝置。
電滲 : 在電場中,由於多孔支援物吸附水中的離子使支援物表面相對帶電,在電場作用下,溶液就向一定方向移動,此種現象稱為電滲。如紙上電泳所用的濾紙纖維素帶有負電荷;瓊脂糖電泳中,所用的瓊脂糖由於大量硫酸根的存在也帶有負電荷,它們使水感應產生水合氫離子 (h+3o) 。
在外電場的作用下,水向負極移動。如果被測定樣品也帶正電荷,則移動更快;如果被測定樣品帶負電荷,則移動減慢。所以電泳時,顆粒泳動所表現的速度決定於顆粒本身的泳動速度和溶液的電滲作用。
因此在選用支援物時,應儘量避免高電滲作用的物質。
血清蛋白質醋酸纖維薄膜電泳的實驗失敗了!
5樓:依藍雨夕
你點的樣過少,只有平行於膜的那一點,而且條帶之間沒有分開。
6樓:清輝冷冷
你點樣的時候是在距負極2至3釐米處點的嗎?
血清蛋白質醋酸纖維素薄膜電泳實驗報告怎麼寫?
7樓:匿名使用者
你們沒有實驗報告嗎?先按照上面的寫清楚1,試驗目的 2,試驗器材藥品 3,試驗步驟(操作過程),注意寫清實驗問題分析,最後是實驗結論。注意生化不像生理等科目,它主要是以驗證性的實驗為主,也就是說實驗結論都是不用你再去另外思考的,書上應該有(好像是「醋酸纖維素薄膜電泳可將血清蛋白質分成五個區帶」)
8樓:匿名使用者
簡述血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳原理
9樓:小月下忍者
呦,對於電泳嘛,就不得不提到膠體問題了,因為血紅蛋白屬於膠體,所以他的電泳就不難解釋了。言歸正傳,正是因為各個電離出的基團都帶電,所以在電場的驅使下向陰陽兩極運動。。。
10樓:匿名使用者
以醋bai酸纖維薄膜為支援du物,浸入ph8.6的緩衝液zhi後吸去多餘液體dao。將微量血清點於膜專上,經電泳後,將薄膜置屬染色液中使蛋白質固定並染色,洗去多於染料。
將膜條烘乾,再將其用透明液進行透明處理。用光密度計或凝膠成像系統進行成分分析比較。
11樓:朱明藝
帶電的顆粒在電來場中向極性相反的電自極泳動的現象稱為電泳。血清中各種蛋白質都有它的特定的等電點,但大部分都在ph7.0以下,若將血清置於ph8.
6的緩衝液中,則幾乎所有的蛋白質均帶負電荷,再帶你場中都向正極移動。由於各種蛋白質在同一ph環境中所帶電荷量以及分子大小和形狀不同,可將血清蛋白質區分出5條區帶,從正極到負極依次為a(清蛋白),α1,,2,β,γ球蛋白。電泳結束後,將醋酸纖維置於染色液。
是蛋白固定並染色,再脫色(洗去多餘燃料)。漿染色後的區帶分別剪開,將其溶於鹼液,進行比色測定,計算各區帶的百分數。
在血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳實驗中,為什麼要將薄膜的點樣端放
在這次實驗中,電極緩衝液ph為8.6。而幾種血清蛋白的等電點 pi 均小於它。也就是說,電泳時,他們均帶正電荷,在電場中向正極移動,所以要將點樣端放於負極,這樣,他們就會向另一個方向移動 與點樣端相反 如果你把它放在正極,那麼,通電以後,就僅僅能看到移動的最慢的一兩種蛋白,因為其他的會很快到頭。其實...
血清蛋白質種類很多,為什麼電泳結果只有5條區域帶
小王閒談娛樂 這是由於m蛋白的化學結構高度均一,因而其電泳遷移率十分一致。如果將這些區帶電泳圖譜掃描,還可計算出異常蛋白的含量和百分比。這種m區帶較多見於 或 區,偶亦可見於 區。m區帶的電泳位置可大致反應出免疫球蛋白的型別,igg型多位於 區至 慢區,iga型多位於 1與 區,igm型多位於 2或...
如何做好外貿,如何做好外貿業務
做外貿之前得先了解外貿知識,還有產品的國際市場 正所謂知己知彼,百戰不殆!最重要的是去踏踏實實地做,堅持下來就會有很大收穫,你可以去看看外貿方面的 例如外貿幫手網,應該對你有幫助 你做什麼產品,外貿銷售主要是網路平臺,展會這兩種方式來開發客戶,展會需要一定的實力,網路平臺的話自己去外貿論壇學習,fo...