1樓：匿名使用者
dna序列測定分手工測序和自動測序，手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今 dna序列分析的主流。美國pe abi公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀，其中310型是臨床檢測實驗室中使用最多的一種型號。
原理：abi prism 310型基因分析儀(即dna測序儀)，採用毛細管電泳技術取代傳統的聚丙烯醯胺平板電泳，應用該公司專利的四色熒光染料標記的ddntp(標記終止物法)，因此通過單引物pcr測序反應，生成的pcr產物則是相差1個鹼基的3''''末端為4種不同熒光染料的單鏈dna混合物，使得四種熒光染料的測序 pcr產物可在一根毛細管內電泳，從而避免了泳道間遷移率差異的影響，大大提高了測序的精確度。由於分子大小不同，在毛細管電泳中的遷移率也不同，當其通過毛細管讀數視窗段時，鐳射檢測器視窗中的ccd(charge-coupled device)攝影機檢測器就可對熒光分子逐個進行檢測，激發的熒光經光柵分光，以區分代表不同鹼基資訊的不同顏色的熒光，並在ccd攝影機上同步成像，分析軟體可自動將不同熒光轉變為dna序列，從而達到dna測序的目的。
分析結果能以凝膠電泳圖譜、熒光吸收峰圖或鹼基排列順序等多種形式輸出。
它是一臺能自動灌膠、自動進樣、自動資料收集分析等全自動電腦控制的測定dn**段的鹼基順序或大小和定量的高檔精密儀器。pe公司還提供凝膠高分子聚合物，包括dna測序膠(pop 6)和genescan膠(pop 4)。這些凝膠顆粒孔徑均一，避免了配膠條件不一致對測序精度的影響。
它主要由毛細管電泳裝置、macintosh電腦、彩色印表機和電泳等附件組成。電腦中則包括資料收集，分析和儀器執行等軟體。它使用最新的ccd攝影機檢測器，使dna測序縮短至2.
5h，pcr片段大小分析和定量分析為 10～40min。
由於該儀器具有dna測序，pcr片段大小分析和定量分析等功能，因此可進行dna測序、雜合子分析、單鏈構象多型性分析(sscp)、微衛星序列分析、長片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析，臨床上可除進行常規dna測序外，還可進行單核苷酸多型性(snp)分析、基因突變檢測、hla配型、法醫學上的親子和個體鑑定、微生物與病毒的分型與鑑定等。
2樓：雙槍老椰子
dna序列測定分手工測序和自動測序，手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今dna序列分析的主流。美國pe abi公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀，其中310型是臨床檢測實驗室中使用最多的一種型號。
abi prism 310型基因分析儀(即dna測序儀)，採用毛細管電泳技術取代傳統的聚丙烯醯胺平板電泳，應用該公司利的四色熒光染料標記的ddntp(標記終止物法)，因此通過單引物pcr測序反應，dna測序儀生成的pcr產物則是相差1個鹼基的3''''末端為4種不同熒光染料的單鏈dna混合物，使得四種熒光染料的測序 pcr產物可在一根毛細管內電泳，從而避免了泳道間遷移率差異的影響，大大提高了測序的精確度。由於分子大小不同，在毛細管電泳中的遷移率也不同，當其通過毛細管讀數視窗段時，鐳射檢測器視窗中的ccd(charge-coupled device)攝影機檢測器就可對熒光分子逐個進行檢測，激發的熒光經光柵分光，以區分代表不同鹼基資訊的不同顏色的熒光，並在ccd攝影機上同步成像，分析軟體可自動將不同熒光轉變為dna序列，從而達到dna測序的目的。分析結果能以凝膠電泳圖譜、熒光吸收峰圖或鹼基排列順序等多種形式輸出。
它是一臺能自動灌膠、自動進樣、自動資料收集分析等全自動電腦控制的測定dn**段的鹼基順序或大小和定量的高檔精密儀器。pe公司還提供凝膠高分子聚合物，包括dna測序膠(pop 6)和genescan膠(pop 4)。這些凝膠顆粒孔徑均一，避免了配膠條件不一致對測序精度的影響。
它主要由毛細管電泳裝置、macintosh電腦、彩色印表機和電泳等附件組成。電腦中則包括資料收集，分析和儀器執行等軟體。它使用最新的ccd攝影機檢測器，使dna測序縮短至2.
5h，pcr片段大小分析和定量分析為 10～40min。
由於該儀器具有dna測序，pcr片段大小分析和定量分析等功能，因此可進行dna測序、雜合子分析、單鏈構象多型性分析(sscp)、微衛星序列分析、長片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析，臨床上可除進行常規dna測序外，還可進行單核苷酸多型性(snp)分析、基因突變檢測、hla配型、法醫學上的親子和個體鑑定、微生物與病毒的分型與鑑定等。
3樓：當紅黑成為習慣
這是我在網上找來的，自己感覺說的挺全的，你看看。
不過我要說一句，目前dna測序所依靠的還是sanger的原理，只是結合了熒光染料，提高了靈敏度。
dna測序原理和方法
dna序列測定分手工測序和自動測序，手工測序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學降解法。自動化測序實際上已成為當今 dna序列分析的主流。美國pe abi公司已生產出373型、377型、310型、3700和3100型等dna測序儀，其中310型是臨床檢測實驗室中使用最多的一種型號。
本實驗介紹的是abi prism 310型dna測序儀的測序原理和操作規程。
【原理】 abi prism 310型基因分析儀(即dna測序儀)，採用毛細管電泳技術取代傳統的聚丙烯醯胺平板電泳，應用該公司專利的四色熒光染料標記的ddntp(標記終止物法)，因此通過單引物pcr測序反應，生成的pcr產物則是相差1個鹼基的3''''末端為4種不同熒光染料的單鏈dna混合物，使得四種熒光染料的測序 pcr產物可在一根毛細管內電泳，從而避免了泳道間遷移率差異的影響，大大提高了測序的精確度。由於分子大小不同，在毛細管電泳中的遷移率也不同，當其通過毛細管讀數視窗段時，鐳射檢測器視窗中的ccd(charge-coupled device)攝影機檢測器就可對熒光分子逐個進行檢測，激發的熒光經光柵分光，以區分代表不同鹼基資訊的不同顏色的熒光，並在ccd攝影機上同步成像，分析軟體可自動將不同熒光轉變為dna序列，從而達到dna測序的目的。分析結果能以凝膠電泳圖譜、熒光吸收峰圖或鹼基排列順序等多種形式輸出。
它是一臺能自動灌膠、自動進樣、自動資料收集分析等全自動電腦控制的測定dn**段的鹼基順序或大小和定量的高檔精密儀器。pe公司還提供凝膠高分子聚合物，包括dna測序膠(pop 6)和genescan膠(pop 4)。這些凝膠顆粒孔徑均一，避免了配膠條件不一致對測序精度的影響。
它主要由毛細管電泳裝置、macintosh電腦、彩色印表機和電泳等附件組成。電腦中則包括資料收集，分析和儀器執行等軟體。它使用最新的ccd攝影機檢測器，使dna測序縮短至2.
5h，pcr片段大小分析和定量分析為 10～40min。
由於該儀器具有dna測序，pcr片段大小分析和定量分析等功能，因此可進行dna測序、雜合子分析、單鏈構象多型性分析(sscp)、微衛星序列分析、長片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析，臨床上可除進行常規dna測序外，還可進行單核苷酸多型性(snp)分析、基因突變檢測、hla配型、法醫學上的親子和個體鑑定、微生物與病毒的分型與鑑定等。
【試劑與器材】
1．bigdye測序反應試劑盒 主要試劑是bigdye mix，內含pe專利四色熒游標記的ddntp和普通dntp，amplitaq dna polymerase fs，反應緩衝液等。
2．pgem-3zf (+) 雙鏈dna對照模板 0.2g/l，試劑盒配套試劑。
3．m13(-21)引物 tgtaaaacgacggccagt，3.2μmol/l，即3.2pmol/μl，試劑盒配套試劑。
4．dna測序模板 可以是pcr產物、單鏈dna和質粒dna等。模板濃度應調整在pcr反應時取量1μl為宜。本實驗測定的質粒dna，濃度為0.2g/l，即200ng/μl。
5．引物 需根據所要測定的dn**段設計正向或反向引物，配製成3.2μmol/l，即3.2pmol/μl。
如重組質粒中含通用引物序列也可用通用引物，如m13(-21)引物，t7引物等。
6．滅菌去離子水或三蒸水。
7．0.2ml或和0.5ml的pcr管 蓋體分離，pe公司產品。
8．3mol/l 醋酸鈉(ph5.2) 稱取40.8g naac·3h2o溶於70ml蒸餾水中，冰醋酸調ph至5.2，定容至100ml，高壓滅菌後分裝。
9．70%乙醇和無水乙醇。
10．naac/乙醇混合液 取37.5ml無水乙醇和2.5ml 3mol/l naac混勻，室溫可儲存1年。
11．pop 6測序膠 abi產品。
12．模板抑制試劑(tsr) abi產品。
13．10×電泳緩衝液 abi產品。
14．abi prism 310型全自動dna測序儀。
15．2400型或9600型pcr儀。
16．臺式冷凍高速離心機。
17．臺式高速離心機或袖珍離心機。
【操作步驟】
1．pcr測序反應
(1) 取0.2ml的pcr管，用記號筆編號，將管插在顆粒冰中，按下表加試劑：
所加試劑 測定模板管 標準對照管
bigdye mix 1μl 1μl
待測的質粒dna 1μl －
pgem-3zf (+) 雙鏈dna － 1μl
待測dna的正向引物 1μl －
m13(-21)引物 － 1μl
滅菌去離子水 2μl 2μl
總反應體積5μl，不加輕礦物油或石蠟油，蓋緊pcr管，用手指彈管混勻，稍離心。
(2) 將pcr管置於9600或2400型pcr儀上進行擴增。98℃變性2min後進行pcr迴圈，pcr迴圈引數為96℃ 10s，50℃ 5s，60℃4min，25個迴圈，擴增結束後設定4℃保溫。
2．醋酸鈉/乙醇法純化pcr產物
(1) 將混合物離心，將擴增產物轉移到1.5ml ep管中。
(2) 加入25μl醋酸鈉/乙醇混合液，充分振盪，置冰上10min以沉澱dna。12 000r/min於4℃離心30 min，小心棄上清。
(3) 加70%(v/v)的乙醇50μl洗滌沉澱2次。12 000r/min於4℃離心5min，小心棄上清和管壁的液珠，真空乾燥沉澱10～15min。
3．電泳前測序pcr產物的處理。
(1) 加入12μl的tsr於離心管中，劇烈振盪，讓其充分溶解dna沉澱，稍離心。
(2) 將溶液轉移至蓋體分離的0.2ml pcr管中，稍離心。
(3) 在pcr儀上進行熱變性(95℃ 2min)，冰中驟冷，待上機。
4．上機操作按儀器操作說明書安裝毛細管，進行毛細管位置的校正，人工手動灌膠和建立執行的測序順序檔案。儀器將自動灌膠至毛細管，1.2kv預電泳5min，按程式設計次序自動進樣，再預電泳(1.
2kv，20min)，在7.5kv下電泳2h。電泳結束後儀器會自動清洗，灌膠，進下一樣品，預電泳和電泳。
每一個樣品電泳總時間為2.5h。電泳結束後儀器會自動分析或列印出彩色測序圖譜。
5．儀器將自動進行序列分析，並可根據使用者要求進行序列比較。如測序序列已知，可通過序列比較以星號標出差異鹼基處，提高工作效率。
6．測序完畢按儀器操作規程進行儀器清洗與保養。
【計算】
測序反應精確度計算公式：100%－差異鹼基數(不包括n數)/650×100%
差異鹼基即測定的dna序列與已知標準dna序列比較不同的鹼基，n為儀器不能辨讀的鹼基。
【注意事項與評價】
1．abi prism 310基因分析儀是高檔精密儀器，需專人操作、管理和維護。
2．本實驗測序pcr反應的總體積是5μl，而且未加礦物油覆蓋，所以pcr管蓋的密封性很重要，除加完試劑後蓋緊pcr管蓋外，最好選用pe公司的pcr管。如pcr結束後pcr液小於4～4.5μl，則此pcr反應可能失敗，不必進行純化和上樣。
3．作為測序使用者來說，只需提供純化好的dna樣品和引物，一個測序pcr反應使用的模板不同，需要的dna量也就不同，pcr測序所需模板的量較少，一般pcr產物需30～90ng，單鏈dna需50～100ng，雙鏈dna需200～500ng，dna的純度一般是a260nm/a280nm為 1.6～2.0，最好用去離子水或三蒸水溶解dna，不用te緩衝液溶解。
引物用去離子水或三蒸水配成3.2pmol/μl較好。
4．本實驗使用的測序試劑盒是bigdye熒游標記終止底物迴圈測序試劑盒，一般可測dna長度為650bp左右。本儀器dna測序精確度為 (98.5±0.
5) %，儀器不能辨讀的鹼基n＜2%，所需測定的長度超過了650bp，則需設計另外的引物。為保證測序更為準確，可設計反向引物對同一模板進行測序，相互印證。對於n鹼基可進行人工核對，有時可以辨讀出來。
為提高測序的精確度，根據星號提示位置，可人工分析該處彩色圖譜，對該處鹼基作進一步核對。
dna測序的測序技術，DNA測序的測序技術
kyoya利 bai術能鎖定個人病變基du因，提前預防和zhi dao 自上世紀專90年代初，學界開始涉足 人屬類基因組計劃 而傳統的測序方式是利用光學測序技術。用不同顏色的熒游標記四種不同的鹼基，然後用鐳射光源去捕捉熒光訊號從而獲得待測基因的序列資訊。雖然這種方法檢測可靠，但是 不菲也是有目共睹的...
為什麼DNA測序需要剪成小段呢，為什麼DNA測序需要剪成小段呢是因為只能
派森諾生物 如果您指的是dna二代測序建庫時需要打斷成特定長度的片段的話，是因為不同儀器的測序讀長是不一樣的，因此在建庫過程中所需要的插入片段長度也有一定的限制，比如對於illumina平臺來說，dna插入片段的長度一般在400 500bp左右，如需測通的話，這個片段長度要進一步剪短至讀長範圍內 如...
全基因組測序的介紹，全基因組重測序的介紹
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