基因抗體藥物研發實驗對實驗員損傷大嗎

時間 2021-08-11 17:55:57

1樓:匿名使用者

基因表達調控主要實驗技術有:chip、rip、rna pull-down、emsa、luciferase

1、 chip實驗

通過與染色質片段共沉澱和pcr技術,在體內檢測與特異蛋白質結合的dn**段。將處於適當生長時期的活細胞用甲醛交聯後將細胞裂解, 染色體分離並打碎為一定大小的片段200bp-1000bp;然後用特異性抗體免疫沉澱目標蛋白與 dna交聯的複合物, 對特定靶蛋白與dn**段進行富集。採用低ph值條件反交聯, dna與蛋白質之間的 schiff鍵水解, 釋放dn**段。

通過對目標片段的純化與檢測,獲得dna與蛋白質相互作用的序列資訊。

2、 rip實驗

rip技術(rna bindingprotein immunoprecipitation,rna結合蛋白免疫沉澱),是研究細胞內rna與蛋白結合情況的技術。運用針對目標蛋白的抗體把相應的rna-蛋白複合物沉澱下來,然後經過分離純化就可以對結合在複合物上的rna進行分析;即用抗體或表位標記物捕獲細胞核內或細胞質中內源性的rna結合蛋白,防止非特異性的rna的結合,免疫沉澱把rna結合蛋白及其結合的rna一起分離出來,結合的rna序列通過microarray(rip-chip),定量rt-pcr或高通量測序(rip-seq)方法來鑑定。是瞭解轉錄後調控網路動態過程的有力工具,能幫助我們發現mirna的調節靶點。

3 、rna pull-down實驗

使用體外轉錄法標記生物素rna探針,然後與胞漿蛋白提取液孵育,形成rna-蛋白質複合物。該複合物可與鏈黴親和素標記的磁珠結合,從而與孵育液中的其他成分分離。複合物洗脫後,通過western blot實驗檢測特定的rna結合蛋白是否與rna相互作用。

4 、emsa實驗

凝膠遷移或電泳遷移率實驗(emsa-electrophoreticmobility shift assay)是一種研究dna結合蛋白和其相關的dna結合序列相互作用的技術,可用於研究dna結合蛋白和其相關的dna結合序列相互作用、dna定性和定量分析。生物素標記的探針依研究的結合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。

5、 luciferase實驗

熒光素酶(luciferase)是自然界中能夠產生生物發光的酶的統稱,不同的能夠控制發光的生物體用不同的熒光素酶來催化不同的發光反應。

螢光生成反應通常分為以下兩步:

螢光素+ atp→ 螢光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+ ppi

螢光素化腺苷酸+ o2→ 氧螢光素+ amp +光

熒光素酶的基因可以被合成並插入到生物體中或轉染到細胞中,將不同型別的細胞(骨髓幹細胞、t細胞等)標記上(即表達)熒光素酶,就可以用高敏感度的ccd相機進行對動物體內進行活體觀察而不會傷害到動物本身。在熒光素酶中加入正確的螢光素底物就可以放出熒光,而發出的光子可以被光敏感元件,如螢光探測器或改進後的光學顯微鏡探測到。這就使得對包括感染在內的多種生命活動程序進行觀察成為可能。

熒光素酶分析可應用於啟動子研究中分析順式作用元件和反式作用因子、藥物篩選、sirna和mirna篩選、分泌途徑及蛋白定位報告基因檢測、活細胞的實時動態研究、訊號轉導通路分析、難轉染的細胞(包括幹細胞和原代細胞)的研究、rna剪接研究。

雙熒光素酶報告基因測試,是結合螢火蟲和海洋腔腸熒光素酶先進的共報告基因測試技術。在用螢火蟲熒光素酶定量基因表達時,通常採用第二個報告基因來減少實驗的變化因素。雙熒光素酶報告基因測試系統,結合prl載體系統,表達第二個報告基因海洋腔腸熒光素酶,在單管中進行雙熒光素酶報告基因測試,快速、靈敏、簡便。

其應用廣泛,可同時分析多個調控元件、同時分析多個訊號轉導通路、單次篩選一個以上的靶點(包括脫靶效應、分析兩個或多個通路之間的相互作用)。

2樓:匿名使用者

一般不會,一個進實驗室的人最基本應該具備了一定的實驗素養,規範的操作和適當的保護,基本上就沒什麼安全問題了。

抗體藥物的研發需要用到基因測序之類的嗎

3樓:匿名使用者

水稻是重要的糧食作物,在遺傳學、回分子生物答學及基因組學研究中具有重要地位,同時也是第一個全基因組測序的禾穀類作物。粳稻品種日本晴和秈稻品種93-11分別通過克隆連線克隆法(clone-by-clone)和全基因組鳥槍法(wgs)進行了全基因組測序,其中日本晴參考序列被公認為現有作物基因組序列中質量最高的,因此日本晴和9311在基因測序中主要用作參考基因組。您是研究種質資源或作物育種的吧,或者是專業做基因測序的。

4樓:匿名使用者

這個當然需要呀,康體生命就有cro抗體藥物研發的專案,抗體藥研發一般要經歷:抗原免疫羊駝、駱駝、鯊魚等動物,製備血清,構建噬菌體文庫,抗體篩選、elisa檢測、去毒、臨床驗證等等

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