1樓：匿名使用者
這是用rfect轉染mdck的方法，本說明書適用於24孔培養板的轉染實驗，其他規格的培養板的用量參照下面**，**給出的是每孔的用量與體積。
a. 細胞接種：轉染前一天接種細胞，每孔 500 μl 培養基（不可加抗生素），使細胞在轉染時密度在30-50% 。
b. sirna-rfect混合物準備：
1. 6pmol sirna 用50μl無血清培養基稀釋。
2. 2μl rfect用50μl無血清培養基稀釋。輕輕混勻，室溫孵育5min。注意：確保在25 min內執行第三步操作，不要過於延遲。
3. 孵育5min後，將sirna 稀釋液與rfect 稀釋液混合（總體積100μl）。輕輕混勻，室溫孵育20 min。
c. 將混合物加到培養的細胞內（完全培養基培養）：
1. 將100μl混合物加入培養孔內，培養孔內含有0.5ml培養的細胞。輕輕晃動培養板，混勻。
2. 37°c培養18-72h，檢測基因抑制效果。如果需要，細胞培養4-6h時可以更換培養基，但不是必須。孵育時間的長短，取決於細胞型別、
所幹擾基因本身及分析方法。可設定不同的孵育時間進行實驗以確定最佳孵育時間。
如何用rt-qpcr檢測rna濃度
2樓：匿名使用者
提rna你會吧。。。 反轉錄你會吧。。。如果只是檢測一般的mrna的表達
量 就用poly t反轉錄就專可以了 如果是特殊
屬的必須去另外合成特異引物 如果你想得到確切的濃度值 那必須在做rt的時候檢測一個標準品 就是這裡面東西的濃度你是確切知道的 然後做一條標準品曲線 然後拿你要檢測的那個得到的值帶到那個曲線裡面就算出濃度了 大部分時候都是檢測相對含量 就是這個mrna在不同東西里面的比較 那就不用做標準品曲線 直接把得到的幾個值比較下關係就可以了 大部分檢測用的內參都是gapdh 其他還有u6 u7可選
脂質體轉染原理，細胞轉染原理
星星快快星星 1定義編輯 最初，人們只是運用脂質體模擬生物膜，研究膜的構造及功能，從而發現了膜的融合及內吞作用，因而可用作外源物質進入細胞的載體。2特徵編輯 陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用將dna分子包裹入內，形成dna一脂複合體，也能被表面帶負電荷的細胞膜吸附，再通過膜的融...
siRNA轉染實驗，如何選擇siRNA轉染試劑
1.設計合成有效的sirna rnai的核心需要sirna對相應mrna進行有效的結合和作用。sirna的設計合成首先很重要，最優的設計可以用最小的工作濃度取得滿意的沉 默效果，減少副反應的發生。sirna的設計可以通過檢索,優先選用經過驗證的sirna或設計多對sirna。需要強調的是，需要同時設...
什麼樣的轉染試劑轉染效果比較好呢
只能給你建議，我用過pei 聚乙烯亞胺和 invitrogen的lipo2000，lipo2000效率要高一些，但pei轉一些常規的細胞也夠用了。其他的轉染試劑我沒用過 依海茶館 達科為 的polyplus轉染試劑用於快速生長的貼壁細胞結果相當不錯，重複性也很高，效率也高，比較便宜 它是線性的聚乙烯...