1樓:匿名使用者
原理就是去掉植物細胞壁 細胞膜 質體 線粒體 葉綠體 剩下細胞核了。就是dna了。
通常採用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞,由於植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對dna的抽提產生不利的影響,在抽提緩衝液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨,材料易於破碎,並減少研磨過程中各種酶類的作用。
十二烷基肌酸鈉(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化銨(hexadyltrimethyl ammomum bromide,簡稱為ctab)、十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,簡稱sds)等離子型表面活性劑,能溶解細胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,從而使dna得以遊離出來。再加入苯酚和氯仿等有機溶劑,能使蛋白質變性,並使抽提液分相,因核酸(dna、rna)水溶性很強,經離心後即可從抽提液中除去細胞碎片和大部分蛋白質。上清液中加入無水乙醇使dna沉澱,沉澱dna溶於te溶液中,即得植物總dna溶液
2樓:匿名使用者
這個什麼意思啊 不是很懂呢!
3樓:匿名使用者
一般採用ctab法,具體原理與步驟去baidu or google吧!
4樓:
大哥 給分告訴你~~~~
植物dna提取的原理和方法?其中乙醇和氯仿一異成醇各起什麼作用
5樓:
植物dna提取方法是採用ctab法。
ctab,是一種陽離子去汙劑,能與核酸形成複合物,此複合物在高鹽(>0.7mol/l) 濃度下可溶,並穩定存在,但在低鹽濃度(0.1~0.
5mol/l nacl)下ctab-核酸複合物就因溶解度降低而沉澱,而大部分的蛋白質及多糖等仍溶解於溶液中。通過有機溶劑抽提,去除蛋白、多糖、酚類等雜質後加入乙醇沉澱即可使核酸分離出來。經離心棄上清後,ctab-核酸複合物再用70%酒精浸泡可洗脫掉ctab。
無水乙醇:沉澱dna。乙醇的優點是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對dna很安全,因此是理想的沉澱劑。
dna溶液是dna以水合狀態穩定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪去dna周圍的水分子,使dna失水而易於聚合。
氯仿:克服酚的缺點;加速有機相與液相分層。
異戊醇:減少蛋白質變性操作過程中產生的氣泡。異戊醇可以降低表面張力,從而減少氣泡產生。
另外,異戊醇有助於分相,使離心後的上層含dna的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。
微生物dna提取的原理和方法是什麼?
質粒dna的提取與基因組dna的提取在原理和方法方面有何異同
6樓:哊點壞
質粒dna提取一般抄用沸水浴法和襲鹼裂解法,bai現在一般都採用du鹼裂解法,並有試劑盒可用zhi。它主要是dao將細胞內的環狀質粒提取出來,一般需要用sds裂解,rna酶降解,然後過柱,再進行洗脫.過程比較簡單。
而基因組dna提取則較為複雜,也需要用sds裂解和rnd酶降解,但降解時間較長,同時對有些革蘭氏陽性細菌還要進行溶菌酶處理,最後用氯仿-苯酚進行除蛋白,這一步重複進行多次,在用氯仿除去多餘的苯酚,用乙醇清洗烘乾後溶於te緩衝液中。整個過程比提質粒更復雜,耗時也更長。
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