1樓：生活類答題小能手
緩衝液在電泳過程中的一個作用是維持合適的ph。電泳時陽極與陰極都會發生電解反應，陽極發生的是氧化反應，陰極發生的是還原反應，長時間的電泳將使陽極變酸，陰極變鹼。一個好的緩衝系統應有較強的緩衝能力，使溶液兩極的ph保持基本不變。
電泳緩衝液的另一個作用是使溶液具有一定的導電性，以利於dna分子的遷移，例如，一般電泳緩衝液中應含有0.01-0.04mol/l的na離子，na離子的濃度太低時電泳速度變慢；太高時就會造成過大的電流使膠發熱甚至熔化。
電泳緩衝液還有一個組分是edta，加入濃度為1-2mmol/l，目的是螯合mg離子等，防止電泳時啟用dna酶，此外還可防止mg離子與核酸生成沉澱。
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在緩衝溶液中加入少量強酸或強鹼，其溶液ph值變化不大，但若加入酸，鹼的量多時，緩衝溶液就失去了它的緩衝作用。這說明它的緩衝能力是有一定限度的。
緩衝溶液的緩衝能力與組成緩衝溶液的組分濃度有關。0.1mol·l⁻¹hac和0.
1mol·l⁻¹naac組成的緩衝溶液，比0.01mol·l⁻¹hac和0.01mol·l⁻¹naac的緩衝溶液緩衝能力大。
關於這一點通過計算便可證實。但緩衝溶液組分的濃度不能太大，否則，不能忽視離子間的作用。
組成緩衝溶液的兩組分的比值不為1∶1時，緩衝作用減小，緩衝能力降低，當c（鹽）/c（酸）為1∶1時△ph最小，緩衝能力大。不論對於酸或鹼都有較大的緩衝作用。緩衝溶液的ph值可用下式計算：
此時緩衝能力大。緩衝組分的比值離1∶1愈遠，緩衝能力愈小，甚至不能起緩衝作用。對於任何緩衝體系，存在有效緩衝範圍，這個範圍大致在pkaφ（或pkbφ）兩側各一個ph單位之內。
2樓：北京索萊寶科技****
tbe 緩衝液是生物學中常使用的核酸電泳緩衝鹽溶液，主要用於 dna的瓊脂糖凝膠電泳。tbe 的主要成分是tris- 硼酸鹽與edta，緩衝能力強，適合較長時間電泳，解析度較高，電泳小於1kb 的片段時分離效果好。tbe 緩衝液中的硼酸成分會影響 dna**效率以及後續的酶反應，若要進行dn**段的瓊脂糖凝膠電泳**實驗，建議使用tae 緩衝液。
瓊脂糖凝膠電泳具體操作步驟是什麼？需要注意什麼事項？ 10
3樓：匿名使用者
一、操作步驟：
1、電泳方法
一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以；如果需要解析度高的電泳，特別是只有幾個bp的差別應該選擇聚丙烯醯胺凝膠電泳；用普通電泳不合適的巨大dna鏈應該使用脈衝凝膠電泳。
2、凝膠濃度
對於瓊脂糖凝膠電泳，濃度通常在0.5～2%之間，低濃度的用來進行大片段核酸的電泳，高濃度的用來進行小片段分析。低濃度膠易碎，小心操作和使用***的瓊脂糖是解決辦法。
3、緩衝液
常用的緩衝液有tae和tbe，而tbe比tae有著更好的緩衝能力。電泳時使用新制的緩衝液可以明顯提高電泳效果。
4、電壓和溫度
電泳時電場強度不應該超過20v/cm，電泳溫度應該低於30℃，對於巨大的dna電泳，溫度應該低於15℃。
5、dna樣品的純度和狀態
注意樣品中含鹽量太高和含雜質蛋白均可以產生條帶模糊和條帶缺失的現象。乙醇沉澱可以去除多餘的鹽，用酚可以去除蛋白。
6、dna的上樣
正確的dna上樣量是條帶清晰的保證。注意太多的dna上樣量可能導致dna帶型模糊，而太小的dna上樣量則導致帶訊號弱甚至缺失。
7、marker的選擇
dna電泳一定要使用dna marker或已知大小的正對照dna來估計dn**段大小。marker應該選擇在目標片段大小附近ladder較密的，這樣對目標片段大小的估計才比較準確。
8、凝膠的染色和觀察
實驗室常用的核酸染色劑是溴化乙錠（eb），染色效果好，操作方便，但是穩定性差，具有毒性。注意觀察凝膠時應根據染料不同使用合適的光源和激發波長，如果激發波長不對，條帶則不易觀察，出現條帶模糊的現象。
二、注意事項：
1、巨大的dna鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導致缺帶。
2、高濃度的膠可能使分子大小相近的dna帶不易分辨，造成條帶缺失現象。
3、電泳緩衝液多次使用後，離子強度降低，ph值上升，緩衝效能下降，可能使dna電泳產生條帶模糊和不規則的dna帶遷移的現象。
4、如果電泳時電壓和溫度過高，可能導致出現條帶模糊和不規則的dna帶遷移的現象。特別是電壓太大可能導致小片段跑出膠而出現缺帶現象。
5、變性的dna樣品可能導致條帶模糊和缺失，也可能出現不規則的dna條帶遷移。在上樣前不要對dna樣品加熱，用20mm nacl緩衝液稀釋可以防止dna變性。
6、太多的dna上樣量可能導致dna帶型模糊，而太小的dna上樣量則導致帶訊號弱甚至缺失。
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瓊脂糖凝膠具有網路結構，物質分子通過時會受到阻力，大分子物質在湧動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決於淨電荷的性質和數量，而且還取決於分子大小，這就大大提高了分辨能力。
但由於其孔徑相比於蛋白質太大，對大多數蛋白質來說其分子篩效應微不足道，現廣泛應用於核酸的研究中。
蛋白質和核酸會根據ph不同帶有不同電荷，在電場中受力大小不同，因此跑的速度不同，根據這個原理可將其分開。電泳緩衝液的ph在6~9之間，離子強度0.02~0.
05為最適。常用1%的瓊脂糖作為電泳支援物。
瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的dn**段，其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低，但它製備容易，分離範圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離dna的範圍為0.2-20kb，利用脈衝電泳，可分離高達10^7bp的dn**段。
dna分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。dna分子在高於等電點的ph溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。由於糖-磷酸骨架在結構上的重複性質，相同數量的雙鏈dna幾乎具有等量的淨電荷，因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。
4樓：匿名使用者
這是我做病毒檢測實驗試劑盒的說明書部分，看是否對你有幫助：
配製1%的膠進行電泳
1 稱取0.4g瓊脂糖放於錐形瓶中，再量取40ml的0.5×tbe溶液混合，放於微波爐中煮沸，至溶液清徹透明為止，大約需1分40秒。
2 冷卻到60℃時（放於掌心，能感覺到湯但又能忍受。）加2μl核酸染料，搖勻。
3 組裝好制膠器，並調至水平。將膠倒於制膠器中，插好梳子。待40分鐘膠冷卻凝固後，就可放於倒好電泳緩衝液的電泳槽中進行點樣。
4 取5-10μl樣品溶液，加1-2μl 6×loading dye，混合均勻後進行點樣。每排點樣孔要點一個5μl的marker。
5 點完後，調電泳儀各引數進行電泳：u：80v；a；200a；t：40min。
電泳結束，凝膠成像系統觀察結果。
做實驗需要注意的一點就是要戴手套操作，保護好自己。像如果用的核酸染料是eb、緩衝液是tae的話，就要更加小心了，那玩意兒致癌性比較強；像我們用的是goldviewtm 核酸染料和tae還不是特別要緊。
還有就是，這裡說的40ml制的一般都是25孔的中膠，你要根據所需要的孔數來按比例調節用量。膠不能制的太厚或者太薄，二者都不利於電泳的。
煮膠的時候，一定要讓膠完全溶解（拿起來對著光照看，沒有亮亮的小點出現），不然跑出來的膠不好看；煮的時間也不能太長，煮久了對樣品的**這類的可能有影響的。
5樓：匿名使用者
1.選擇合適的marker
2. 配膠的緩衝液與電泳緩衝液要是同一種，且濃度一致（1倍）3. 點樣時要加入loading buffer，並注意，不要將樣點到點樣孔之外（飄樣），也不要將膠戳漏（漏樣）
4. 根據片段大小，及電泳檢測目的，選擇合適的電壓及電泳時間5. eb染色。
可選擇制膠時加入eb（要在溶玩膠後，且溫度至室溫時（用手握住制膠容器，不燙手即可））；或電泳結束後，將膠放入eb溶液中染色。
瓊脂糖凝膠電泳marker的作用
瓊脂糖凝膠電泳marker的作用是分子標記。dna分子標記具有的優越性有 大多數分子標記為共顯性，對隱性性狀的選擇十分便利 基因組變異極其豐富，分子標記的數量幾乎是無限的 在生物發育的不同階段，不同組織的dna都可用於標記分析 分子標記揭示來自dna的變異 表現為中性，不影響目標性狀的表達，與不良性...
如何選用瓊脂糖凝膠電泳時的，如何選用瓊脂糖凝膠電泳時的marker
北京索萊寶科技 如果是核酸marker比較簡單吧,就是看marker條帶的大小和你的目標條帶的關係,儘量選擇目標條帶接近分子量的marker,或是在目標分子量附近條帶較多的marker.另外就是,如果目標分子量很小,凝膠通常選擇的濃度較大,就不能用分子量太大的marker,例如,只檢測200bp的條...
瓊脂糖凝膠電泳的DNA為什麼要酶切
雷昊文庫 你好 我所知道的酶切的目的大致分為兩大類 載體的檢測和southern預備實驗。你做的如果是常規的pcr檢測，一般不需要酶切後再電泳，只是檢測一下你的目的基因是否成功進入你的受體材料，酶切後反而看不出來了。酶切的依據是你自己的載體圖中酶切位點的位置與類別，根據不同的酶切位點選擇不同種類的酶...