1樓：匿名使用者
一、操作步驟：
1、電泳方法
一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以；如果需要解析度高的電泳，特別是只有幾個bp的差別應該選擇聚丙烯醯胺凝膠電泳；用普通電泳不合適的巨大dna鏈應該使用脈衝凝膠電泳。
2、凝膠濃度
對於瓊脂糖凝膠電泳，濃度通常在0.5～2%之間，低濃度的用來進行大片段核酸的電泳，高濃度的用來進行小片段分析。低濃度膠易碎，小心操作和使用***的瓊脂糖是解決辦法。
3、緩衝液
常用的緩衝液有tae和tbe，而tbe比tae有著更好的緩衝能力。電泳時使用新制的緩衝液可以明顯提高電泳效果。
4、電壓和溫度
電泳時電場強度不應該超過20v/cm，電泳溫度應該低於30℃，對於巨大的dna電泳，溫度應該低於15℃。
5、dna樣品的純度和狀態
注意樣品中含鹽量太高和含雜質蛋白均可以產生條帶模糊和條帶缺失的現象。乙醇沉澱可以去除多餘的鹽，用酚可以去除蛋白。
6、dna的上樣
正確的dna上樣量是條帶清晰的保證。注意太多的dna上樣量可能導致dna帶型模糊，而太小的dna上樣量則導致帶訊號弱甚至缺失。
7、marker的選擇
dna電泳一定要使用dna marker或已知大小的正對照dna來估計dn**段大小。marker應該選擇在目標片段大小附近ladder較密的，這樣對目標片段大小的估計才比較準確。
8、凝膠的染色和觀察
實驗室常用的核酸染色劑是溴化乙錠（eb），染色效果好，操作方便，但是穩定性差，具有毒性。注意觀察凝膠時應根據染料不同使用合適的光源和激發波長，如果激發波長不對，條帶則不易觀察，出現條帶模糊的現象。
二、注意事項：
1、巨大的dna鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導致缺帶。
2、高濃度的膠可能使分子大小相近的dna帶不易分辨，造成條帶缺失現象。
3、電泳緩衝液多次使用後，離子強度降低，ph值上升，緩衝效能下降，可能使dna電泳產生條帶模糊和不規則的dna帶遷移的現象。
4、如果電泳時電壓和溫度過高，可能導致出現條帶模糊和不規則的dna帶遷移的現象。特別是電壓太大可能導致小片段跑出膠而出現缺帶現象。
5、變性的dna樣品可能導致條帶模糊和缺失，也可能出現不規則的dna條帶遷移。在上樣前不要對dna樣品加熱，用20mm nacl緩衝液稀釋可以防止dna變性。
6、太多的dna上樣量可能導致dna帶型模糊，而太小的dna上樣量則導致帶訊號弱甚至缺失。
擴充套件資料
瓊脂糖凝膠具有網路結構，物質分子通過時會受到阻力，大分子物質在湧動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決於淨電荷的性質和數量，而且還取決於分子大小，這就大大提高了分辨能力。
但由於其孔徑相比於蛋白質太大，對大多數蛋白質來說其分子篩效應微不足道，現廣泛應用於核酸的研究中。
蛋白質和核酸會根據ph不同帶有不同電荷，在電場中受力大小不同，因此跑的速度不同，根據這個原理可將其分開。電泳緩衝液的ph在6~9之間，離子強度0.02~0.
05為最適。常用1%的瓊脂糖作為電泳支援物。
瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的dn**段，其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低，但它製備容易，分離範圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離dna的範圍為0.2-20kb，利用脈衝電泳，可分離高達10^7bp的dn**段。
dna分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。dna分子在高於等電點的ph溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。由於糖-磷酸骨架在結構上的重複性質，相同數量的雙鏈dna幾乎具有等量的淨電荷，因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。
2樓：匿名使用者
這是我做病毒檢測實驗試劑盒的說明書部分，看是否對你有幫助：
配製1%的膠進行電泳
1 稱取0.4g瓊脂糖放於錐形瓶中，再量取40ml的0.5×tbe溶液混合，放於微波爐中煮沸，至溶液清徹透明為止，大約需1分40秒。
2 冷卻到60℃時（放於掌心，能感覺到湯但又能忍受。）加2μl核酸染料，搖勻。
3 組裝好制膠器，並調至水平。將膠倒於制膠器中，插好梳子。待40分鐘膠冷卻凝固後，就可放於倒好電泳緩衝液的電泳槽中進行點樣。
4 取5-10μl樣品溶液，加1-2μl 6×loading dye，混合均勻後進行點樣。每排點樣孔要點一個5μl的marker。
5 點完後，調電泳儀各引數進行電泳：u：80v；a；200a；t：40min。
電泳結束，凝膠成像系統觀察結果。
做實驗需要注意的一點就是要戴手套操作，保護好自己。像如果用的核酸染料是eb、緩衝液是tae的話，就要更加小心了，那玩意兒致癌性比較強；像我們用的是goldviewtm 核酸染料和tae還不是特別要緊。
還有就是，這裡說的40ml制的一般都是25孔的中膠，你要根據所需要的孔數來按比例調節用量。膠不能制的太厚或者太薄，二者都不利於電泳的。
煮膠的時候，一定要讓膠完全溶解（拿起來對著光照看，沒有亮亮的小點出現），不然跑出來的膠不好看；煮的時間也不能太長，煮久了對樣品的**這類的可能有影響的。
3樓：匿名使用者
1.選擇合適的marker
2. 配膠的緩衝液與電泳緩衝液要是同一種，且濃度一致（1倍）3. 點樣時要加入loading buffer，並注意，不要將樣點到點樣孔之外（飄樣），也不要將膠戳漏（漏樣）
4. 根據片段大小，及電泳檢測目的，選擇合適的電壓及電泳時間5. eb染色。
可選擇制膠時加入eb（要在溶玩膠後，且溫度至室溫時（用手握住制膠容器，不燙手即可））；或電泳結束後，將膠放入eb溶液中染色。
瓊脂糖凝膠電泳常見問題有哪些
4樓：匿名使用者
用瓊脂或瓊脂糖作支援介質的一種電泳方法。對於分子量較大的樣品，如大分子核酸、病毒等，一般可採用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳常見為題都有哪些？
dna帶模糊
dna降解：瓊脂糖凝膠電泳試驗中要避免核酸酶汙染
電泳緩衝液陳舊：電泳緩衝液多系使用後，離子強度降解，ph值上升，緩衝能力減弱，從而影響電泳實驗，建議經常更換電泳緩衝液。
所用電泳條件不合適：電泳時電壓不應超過20v/cm，溫度<30℃；巨大dna鏈電泳，溫度應該<15℃；檢車所有電泳緩衝液是否有足夠的緩衝能力
dna上揚量過多：應減少凝膠中dna上樣量。
dna樣含鹽量過高：電泳前通過乙醇沉澱去除過多的鹽。
有蛋白汙染：電泳前酚抽提去除蛋白
不規則dna帶遷移
對於λ/hindⅲ片段cos位點復性：電泳前於65℃加熱dna5分鐘，然後在冰上冷卻5分鐘。
電泳條件不合適：電泳電壓不超過20v/cm；溫度<30℃；經常更換電泳緩衝液。
dna變性：以20mm naci buffer稀釋dna，電泳前勿加熱。
帶弱或無dna帶
dna的上樣量不夠：增加dna的上樣量；聚丙烯醯胺凝膠電泳比瓊脂糖凝膠電泳靈敏度稍高，上樣量可適當降低。
dna降解：避免dan的核酸酶汙染
dna走出凝膠：縮短電泳時間，降低電壓，增強凝膠濃度。
對於eb染色的dna，所用光源不合適：應用短波長（254mm）的紫外光源
dna帶缺失
小dna帶走出凝膠：縮短電泳時間，降低電壓，增強凝膠濃度。
分子大小相近的dna帶不易分辨：增加電泳時間，核准正確的凝膠濃度。
dna變性：電泳前請勿高溫加熱nda鏈，以20mm naci buffer稀釋dna
dna鏈巨大，常規凝膠電泳不合適：在脈衝凝膠電泳上分析。
綜上所訴，瓊脂糖凝膠電泳實驗需注意以下幾點：
1.體系配製時候最關鍵的幾個試劑一定要確定它們還有效、或者還沒被汙染：引物，酶，超純水。
這些東西最好自己收好，寫上個人的名字放好，冰盒上記得帶上橡皮筋，這樣就不會因為別人翻冰箱時候把你的冰盒碰散了，試劑都碰掉。否則，你的試劑被汙染了，到時候陰性對照狂出條帶，再去找汙染源很麻煩。而且配置體系時候要注意保持實驗區的乾淨，事先可用小噴壺進行酒精噴霧，固定空氣中的dna，而且全程要戴手套，避免汙染體系。
2.pcr體系要摸準，最好用人家都做得很多的老體系來上手。
3.要想得到漂亮的電泳圖，可以在pcr開始時候就把膠倒上（前提是你的pcr總時間在1.5小時左右，並且1.
5小時候之後你還在實驗室。），讓凝膠涼著，這樣凝膠的上樣孔會比較規則，膠體裡面的其本身的孔徑也會較規則。如果你要第二天再跑膠，千萬記得把pcr完畢的樣本放入4℃儲存。
第二天做時候建議把膠涼上25分鐘左右。
4.瓊脂糖凝膠電泳上樣時候建議使用排槍上樣，不僅快速而且樣本加到膠孔裡的速度一致。當然，排槍上樣最好選用進口槍頭，國產槍頭就不要想了。
5.不管電泳室使用的頻率高還是低，我都建議每次瓊脂糖凝膠電泳時候更換電泳液，避免出現“＾”形條帶。
瓊脂糖凝膠電泳marker的作用
瓊脂糖凝膠電泳marker的作用是分子標記。dna分子標記具有的優越性有 大多數分子標記為共顯性，對隱性性狀的選擇十分便利 基因組變異極其豐富，分子標記的數量幾乎是無限的 在生物發育的不同階段，不同組織的dna都可用於標記分析 分子標記揭示來自dna的變異 表現為中性，不影響目標性狀的表達，與不良性...
如何選用瓊脂糖凝膠電泳時的，如何選用瓊脂糖凝膠電泳時的marker
北京索萊寶科技 如果是核酸marker比較簡單吧,就是看marker條帶的大小和你的目標條帶的關係,儘量選擇目標條帶接近分子量的marker,或是在目標分子量附近條帶較多的marker.另外就是,如果目標分子量很小,凝膠通常選擇的濃度較大,就不能用分子量太大的marker,例如,只檢測200bp的條...
簡述tbe在瓊脂糖凝膠電泳中的作用
生活類答題小能手 緩衝液在電泳過程中的一個作用是維持合適的ph。電泳時陽極與陰極都會發生電解反應，陽極發生的是氧化反應，陰極發生的是還原反應，長時間的電泳將使陽極變酸，陰極變鹼。一個好的緩衝系統應有較強的緩衝能力，使溶液兩極的ph保持基本不變。電泳緩衝液的另一個作用是使溶液具有一定的導電性，以利於d...