SDS裂解DNA時,加入TE的濃度是多少

時間 2023-01-15 01:30:08

1樓:匿名使用者

提取基因組dna和細胞核dna是不同的方法提取細胞核要先把細胞破碎分離出細胞核,要在甘油或其他保護劑中進行sds十二烷基磺酸鈉:可破壞細胞膜、核膜,並使組織蛋白與dna分離catb是一種抽提液,破壞細胞膜的。

sds鹼裂解法提取植物dna中加醋酸銨的作用是什麼,加了之後放冰上的作用是什麼? 10

2樓:彩虹的光年

鹼裂解法提取質粒dna的時候加醋酸銨,利用形成的hac/ac-緩衝體系平衡溶液二中naoh的強鹼性,使dna復性;另一方面,nh4+與溶液二中的sds(結合到蛋白質上)結合生成微溶性物質,促使體系中的蛋白質以及蛋白質所連線的基因組dna的沉降dna呈負性,加入陽離子nh4+中和電荷,促進dna在無水乙醇中沉澱。

冰上放置5min左右是為了讓質粒dna復性。

3樓:田間雜草

提植物的dna,這個試劑盒就很好用啦ultraclean™ plant dna isolation 內能從50mg植物組織中提取得到最多高達20μg基因組dna了。一個試劑盒能做50次提取。

sds法提取植物dna,dna提取液中的各項藥劑濃度及配置時每種藥品的體積,及提取方法。謝謝 20

sds法裂解細胞提取dna過程中要注意哪些問題

4樓:折納紹雪曼

兩者都是靠表面活性劑(sds、ctab)破裂細胞膜,從而釋放細胞核心酸。建議在加入te緩衝液後充分吹打重懸。在加入sds或ctab後也用槍頭吹打幾次。

100mg的,稱25mg,應該稱多少g溶於50ml的瓶子

5樓:網友

1 家裡有酒杯嗎(小玻璃杯)一杯差不多二兩即為100ml,半杯就是50ml2 一般治咳咳嗽口服液是用100ml瓶子裝的,裡面有一個小量杯,有刻度的,拿它量很簡單。

提取dna時裂解液的配製方法應該是怎樣的? 10

6樓:匿名使用者

一般要50mm 的tris-hcl緩衝液,恐怕你這個不符合要求,沒法配。

7樓:x_d鈣

dna裂解液配製: 母液配製:

1. 500mmol tris-hcl(

稱取 tris,加入150ml 蒸餾水,加入hcl調ph至,定容至250ml。

2. 100mmol edta或edta-na2

稱取 edta或者 edta-na2,加入200ml 蒸餾水,調ph至,定容至250ml。

3. 5mol nacl

稱取 nacl,加入90ml 蒸餾水,定容至100ml。 4. 10% sds (已配製)

稱取10gsds,加入100ml蒸餾水。

配製1000ml裂解液:加入溶液1體積為200ml,加入溶液2體積為250ml,加入溶液3體積為100ml,加入溶液4為100ml。

注:配製500ml裂解液則相應減半。

真菌的dna提取方法有哪些,要詳細操作步驟

8樓:

(一)1.取真菌菌絲, 在液氮中迅速研磨成粉。

2.加入4ml提取液,快速振盪混勻。

3.加入等體積的4ml的氯仿:異戊醇(24:1),渦旋3~5min(此處是粗提沒有加酚,可以節約成本的喲!),4℃,5min

5.上清用體積的氯仿:異戊醇(24:1)再抽提一次(10,000 rpm,4℃離心5 min)

6.取上清,加入2/3倍體積的-20℃預冷異丙醇或倍體積的無水乙醇沉澱, 混勻, 靜置約30 min

7.用毛細玻棒挑出絮狀沉澱, 用75%乙醇反覆漂洗數次, 再用無水乙醇漂洗1次, 吹乾,重懸於500 ulte中。

8.加入1 ul rnasea (10 mg/ml),37℃處理1 hr

9.用酚(:氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次(10,000 rpm,4℃離心5 min)

10.取上清,1/10v 3m naac,體積的無水乙醇, -70℃沉澱30 min以上。

11.沉澱用75%乙醇漂洗,風乾, 溶於200 ulte中,-20 ℃儲存備用。

dna提取液: tris-hcl(ph , nacl, edta,1%sds,3m naac

(二)1.真菌菌絲 g, 在液氮中迅速研磨成粉。

2.加入3 ml 65℃預熱的dna提取緩衝液,快速振盪混勻65℃水浴30 min, 期間混勻2-3次。

3.加入1 ml 5m kac,冰浴20 min

4.等體積的氯仿:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000 rpm,4℃離心5 min)

5.取上清,加入2/3倍體積的-20℃預冷異丙醇, 混勻, 靜置約30 min

6.用毛細玻棒挑出絮狀沉澱, 用75%乙醇反覆漂洗數次, 再用無水乙醇漂洗1次, 吹乾,重懸於500 l te中。

7.加入1 ul rnasea (10 mg/ml),37℃處理1 hr

8.用酚(:氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次(10,000 rpm,4℃離心5 min)

9.取上清,1/10v 3m naac,體積的無水乙醇, -70℃沉澱30 min以上。

10.沉澱用75%乙醇漂洗,風乾, 溶於200 ul te中,-20 ℃儲存備用。

細菌dna提取過程中各部藥品的作用

9樓:百優生物

其實提取細菌基因組dna並不是要用到上面提到的所有試劑。

te是用來浮起細菌的。如。

專果是陽性菌的話最好是用溶菌屬酶處理一下。

sds可以讓細胞裂解,並與核蛋白結合(當然也包括dna)。蛋白酶k自然是降解蛋白的。到這一步可以直接用異丙醇沉澱,70%乙醇洗一次(洗去少量的鹽分)。

涼得差不多再用少量te溶解就得到dna了。

當然,在蛋白酶k處理過後,也可以用 nacl沉澱一下蛋白(dna在此濃度溶解度增加,而蛋白減小)。或者用酚:

氯仿:異戊醇(25::24:

1)ph>抽提,去蛋白。其後依舊用異丙醇沉澱,70%乙醇洗。

ctab/nacl功能與sds相當,但一般用於提取植物基因組。

10樓:匿名使用者

鹼法質粒抽提用到三種溶液:溶液i,50 mm葡萄糖 / 25 mm tris-cl / 10 mm edta,ph ;溶液ii,0.

2 n naoh / 1% sds;溶液iii,3 m 醋酸鉀。

SDS裂解DNA時,加入TE的濃度是多少?有影響麼?

sds裂解dna時,加入te的濃度是多少 提取基因組dna和細胞核dna是不同的方法提取細胞核要先把細胞破碎分離出細胞核,要在甘油或其他保護劑中進行sds十二烷基磺酸鈉 可破壞細胞膜 核膜,並使組織蛋白與dna分離catb是一種抽提液,破壞細胞膜的。dna提取常規溶液中,浸泡緩衝液,ste緩衝液,t...

測dna含量繪標準曲線時怎麼算dna的濃度

北京索萊寶科技 測dna含量繪標準曲線時,算dna的濃度的方法 先把標準品的濃度和每個標準品的吸光度用excel生成標準曲線,同時得到公式。測量每個樣本的吸光度。把吸光度代入公式,計算出對應的濃度.如果樣本有稀釋,還要乘以稀釋倍數。dna及rna含量測定方法 取5uldna樣品或4ulrna樣品加水...

DNA複製時的引物成分是什麼?作用機理是什麼

dna的複製需要rna引物,這是由dna聚合酶和rna聚合酶的特性決定的。dna聚合酶不能從頭合成dna 需要引物dna orrna 因為dna聚合酶具有高保真系統,這個系統要求,在新鏈的延伸過程中,只有新新增的鹼基與模板鍊形成雙螺旋才能繼續鏈的延伸,否則延伸終止,啟動切除修復機制,直至新增正確的鹼...