1樓:匿名使用者
提取基因組dna和細胞核dna是不同的方法提取細胞核要先把細胞破碎分離出細胞核,要在甘油或其他保護劑中進行sds十二烷基磺酸鈉:可破壞細胞膜、核膜,並使組織蛋白與dna分離catb是一種抽提液,破壞細胞膜的。
sds鹼裂解法提取植物dna中加醋酸銨的作用是什麼,加了之後放冰上的作用是什麼? 10
2樓:彩虹的光年
鹼裂解法提取質粒dna的時候加醋酸銨,利用形成的hac/ac-緩衝體系平衡溶液二中naoh的強鹼性,使dna復性;另一方面,nh4+與溶液二中的sds(結合到蛋白質上)結合生成微溶性物質,促使體系中的蛋白質以及蛋白質所連線的基因組dna的沉降dna呈負性,加入陽離子nh4+中和電荷,促進dna在無水乙醇中沉澱。
冰上放置5min左右是為了讓質粒dna復性。
3樓:田間雜草
提植物的dna,這個試劑盒就很好用啦ultraclean™ plant dna isolation 內能從50mg植物組織中提取得到最多高達20μg基因組dna了。一個試劑盒能做50次提取。
sds法提取植物dna,dna提取液中的各項藥劑濃度及配置時每種藥品的體積,及提取方法。謝謝 20
sds法裂解細胞提取dna過程中要注意哪些問題
4樓:折納紹雪曼
兩者都是靠表面活性劑(sds、ctab)破裂細胞膜,從而釋放細胞核心酸。建議在加入te緩衝液後充分吹打重懸。在加入sds或ctab後也用槍頭吹打幾次。
100mg的,稱25mg,應該稱多少g溶於50ml的瓶子
5樓:網友
1 家裡有酒杯嗎(小玻璃杯)一杯差不多二兩即為100ml,半杯就是50ml2 一般治咳咳嗽口服液是用100ml瓶子裝的,裡面有一個小量杯,有刻度的,拿它量很簡單。
提取dna時裂解液的配製方法應該是怎樣的? 10
6樓:匿名使用者
一般要50mm 的tris-hcl緩衝液,恐怕你這個不符合要求,沒法配。
7樓:x_d鈣
dna裂解液配製: 母液配製:
1. 500mmol tris-hcl(
稱取 tris,加入150ml 蒸餾水,加入hcl調ph至,定容至250ml。
2. 100mmol edta或edta-na2
稱取 edta或者 edta-na2,加入200ml 蒸餾水,調ph至,定容至250ml。
3. 5mol nacl
稱取 nacl,加入90ml 蒸餾水,定容至100ml。 4. 10% sds (已配製)
稱取10gsds,加入100ml蒸餾水。
配製1000ml裂解液:加入溶液1體積為200ml,加入溶液2體積為250ml,加入溶液3體積為100ml,加入溶液4為100ml。
注:配製500ml裂解液則相應減半。
真菌的dna提取方法有哪些,要詳細操作步驟
8樓:
(一)1.取真菌菌絲, 在液氮中迅速研磨成粉。
2.加入4ml提取液,快速振盪混勻。
3.加入等體積的4ml的氯仿:異戊醇(24:1),渦旋3~5min(此處是粗提沒有加酚,可以節約成本的喲!),4℃,5min
5.上清用體積的氯仿:異戊醇(24:1)再抽提一次(10,000 rpm,4℃離心5 min)
6.取上清,加入2/3倍體積的-20℃預冷異丙醇或倍體積的無水乙醇沉澱, 混勻, 靜置約30 min
7.用毛細玻棒挑出絮狀沉澱, 用75%乙醇反覆漂洗數次, 再用無水乙醇漂洗1次, 吹乾,重懸於500 ulte中。
8.加入1 ul rnasea (10 mg/ml),37℃處理1 hr
9.用酚(:氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次(10,000 rpm,4℃離心5 min)
10.取上清,1/10v 3m naac,體積的無水乙醇, -70℃沉澱30 min以上。
11.沉澱用75%乙醇漂洗,風乾, 溶於200 ulte中,-20 ℃儲存備用。
dna提取液: tris-hcl(ph , nacl, edta,1%sds,3m naac
(二)1.真菌菌絲 g, 在液氮中迅速研磨成粉。
2.加入3 ml 65℃預熱的dna提取緩衝液,快速振盪混勻65℃水浴30 min, 期間混勻2-3次。
3.加入1 ml 5m kac,冰浴20 min
4.等體積的氯仿:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000 rpm,4℃離心5 min)
5.取上清,加入2/3倍體積的-20℃預冷異丙醇, 混勻, 靜置約30 min
6.用毛細玻棒挑出絮狀沉澱, 用75%乙醇反覆漂洗數次, 再用無水乙醇漂洗1次, 吹乾,重懸於500 l te中。
7.加入1 ul rnasea (10 mg/ml),37℃處理1 hr
8.用酚(:氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次(10,000 rpm,4℃離心5 min)
9.取上清,1/10v 3m naac,體積的無水乙醇, -70℃沉澱30 min以上。
10.沉澱用75%乙醇漂洗,風乾, 溶於200 ul te中,-20 ℃儲存備用。
細菌dna提取過程中各部藥品的作用
9樓:百優生物
其實提取細菌基因組dna並不是要用到上面提到的所有試劑。
te是用來浮起細菌的。如。
專果是陽性菌的話最好是用溶菌屬酶處理一下。
sds可以讓細胞裂解,並與核蛋白結合(當然也包括dna)。蛋白酶k自然是降解蛋白的。到這一步可以直接用異丙醇沉澱,70%乙醇洗一次(洗去少量的鹽分)。
涼得差不多再用少量te溶解就得到dna了。
當然,在蛋白酶k處理過後,也可以用 nacl沉澱一下蛋白(dna在此濃度溶解度增加,而蛋白減小)。或者用酚:
氯仿:異戊醇(25::24:
1)ph>抽提,去蛋白。其後依舊用異丙醇沉澱,70%乙醇洗。
ctab/nacl功能與sds相當,但一般用於提取植物基因組。
10樓:匿名使用者
鹼法質粒抽提用到三種溶液:溶液i,50 mm葡萄糖 / 25 mm tris-cl / 10 mm edta,ph ;溶液ii,0.
2 n naoh / 1% sds;溶液iii,3 m 醋酸鉀。
SDS裂解DNA時,加入TE的濃度是多少?有影響麼?
sds裂解dna時,加入te的濃度是多少 提取基因組dna和細胞核dna是不同的方法提取細胞核要先把細胞破碎分離出細胞核,要在甘油或其他保護劑中進行sds十二烷基磺酸鈉 可破壞細胞膜 核膜,並使組織蛋白與dna分離catb是一種抽提液,破壞細胞膜的。dna提取常規溶液中,浸泡緩衝液,ste緩衝液,t...
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