1樓：北京索萊寶科技****
測dna含量繪標準曲線時，算dna的濃度的方法：
先把標準品的濃度和每個標準品的吸光度用excel生成標準曲線,同時得到公式。
測量每個樣本的吸光度。
把吸光度代入公式,計算出對應的濃度.如果樣本有稀釋,還要乘以稀釋倍數。
dna及rna含量測定方法：
取5uldna樣品或4ulrna樣品加水到lml。
用lml水做空白。
把樣品杯放在分光光度計比色槽上。
每ul中dna或rna濃度(ug)將是od值的10倍，例如稀釋後樣品在260nm處od值為0.2，則原dna或rna樣品濃度為2ug／ul。
如果想要檢測樣品的純度，那麼還要再測一次280nm處od值，計算二者的比率，若比率接近2，則說明樣品中核酸比較純。若比率小於1.6，則說明蛋白或其它吸收此波長的雜質在其中，建議再用酚／氯仿抽提繼以乙醇沉澱以除去雜質。
如果想檢測樣品中是否殘存酚等有機雜質，那麼還要測定一次230nm處od值。
2樓：百螢生物執事
之前做實驗，朋友介紹了一款aat bioquest 的dna濃度計算器，用著很方便 ，推薦給你
dna濃度計算器
介紹：通過分子量、消光係數、和λmax帶入beer-lambert定律的派生形式，可以確定溶液中dna的濃度。物質的入max是其經歷最強吸光度時的波長。
對於dna，這個波長是260nm。
nucleotide:核苷酸。可以選三種，dsdna（單鏈dna）、ssdna（雙鏈dna）、自定義
dilution factor (optional)：稀釋倍數
pathlength：路徑長度
注意：dna應該溶解在溶液中，dna沉澱將導致濃度計算不準確。
吸光度讀數不應超過儀器的最大檢測限。這可以通過吸收光譜中的平臺來確定。如果吸收光譜平穩，稀釋樣品可以再嘗試一次。
該計算器設定儀器的光程長度為1cm。用於分光光度計的標準比色皿（通常為1cm）。如果使用不同路徑長度，則應在資料輸入過程中更正數值。
使用說明：
選擇核苷酸或選擇自定義序列進入核苷酸序列
在λmax處輸入吸光度。對於典型的核苷酸，λmax是260nm，但這個值可能會根據核苷酸而改變。請使用分光光度計讀數所示的最大吸光度（即最高峰）
如果用稀釋樣品獲得吸光度，請輸入稀釋因子以確定原始樣品濃度
如果路徑長度與1cm不同，請將更正後的數值輸入λ光程文字框
按「計算」顯示濃度
dna濃度計算器
介紹：通過分子量、消光係數、和λmax帶入beer-lambert定律的派生形式，可以確定溶液中dna的濃度。物質的入max是其經歷最強吸光度時的波長。
對於dna，這個波長是260nm。
nucleotide:核苷酸。可以選三種，dsdna（單鏈dna）、ssdna（雙鏈dna）、自定義
dilution factor (optional)：稀釋倍數
pathlength：路徑長度
注意：dna應該溶解在溶液中，dna沉澱將導致濃度計算不準確。
吸光度讀數不應超過儀器的最大檢測限。這可以通過吸收光譜中的平臺來確定。如果吸收光譜平穩，稀釋樣品可以再嘗試一次。
該計算器設定儀器的光程長度為1cm。用於分光光度計的標準比色皿（通常為1cm）。如果使用不同路徑長度，則應在資料輸入過程中更正數值。
使用說明：
選擇核苷酸或選擇自定義序列進入核苷酸序列
在λmax處輸入吸光度。對於典型的核苷酸，λmax是260nm，但這個值可能會根據核苷酸而改變。請使用分光光度計讀數所示的最大吸光度（即最高峰）
如果用稀釋樣品獲得吸光度，請輸入稀釋因子以確定原始樣品濃度
如果路徑長度與1cm不同，請將更正後的數值輸入λ光程文字框
按「計算」顯示濃度
用分光光度計測dna濃度的數值代表什麼意義
3樓：獨孤求答獎
首先,分光光度計測量的樣品必須是均一的,搖勻後再測量結果會準確些.它是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器.
核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能.可以定量溶於緩衝液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈dna,以及rna.核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm.
每種核酸的分子構成不一,因此其換算係數不同.定量不同型別的核酸,事先要選擇對應的係數.如：
1od 的吸光值分別相當於50μg/ml的dsdna,37μg/ml的ssdna,40μg/ml的rna,30μg/ml的olig.測試後的吸光值經過上述係數的換算,從而得出相應的樣品濃度.測試前,選擇正確的程式,輸入原液和稀釋液的體積,爾後測試空白液和樣品液.
然而,實驗並非一帆風順.讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題.靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大.
事實上,分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定範圍內變化,即儀器有一定的準確度和精確度.如eppendorf biophotometer的準確度≤1.0%（1a）.
這樣多次測試的結果在均值1.0%左右之間變動,都是正常的.另外,還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩衝液的ph值,離子濃度等：
在測試時,離子濃度太高,也會導致讀數漂移,因此建議使用ph值一定、離子濃度較低的緩衝液,如te,可大大穩定讀數.樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由於樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品.
這些小顆粒的存在干擾測試效果.為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大於0.1a,吸光值最好在0.
1-1.5a.在此範圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定.
從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高（超過光度計的測試範圍）.最後是操作因素,如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值；混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大；換算係數和樣品濃度單位選擇一致；不能採用視窗磨損的比色杯；樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項.
除了核酸濃度,分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如a260/a280的比值,用於評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm.純淨的樣品,比值大於1.8（dna）或者2.
0（rna）.如果比值低於1.8 或者2.
0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響.a230表示樣品中存在一些汙染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純淨的核酸a260/a230的比值大於2.0.
a320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子.純樣品,a320一般是0.
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