1樓:布思珈藍
(1) 用生物資訊學方法分析並**啟動子區可能的轉錄因子結合位點。
(2)設計引物用pcr法從基因組dna中克隆所需的靶啟動子片段,將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒(pgl3-basic)中。
(3)篩選陽性克隆,測序。擴增克隆並提純質粒備用。
(4) 擴增轉錄因子質粒,提純備用。同時準備相應的空載質粒對照,提純備用。
(5) 培養293(或其它目的細胞),並接種於24孔板中,生長10-24小時(80%匯合度)。
(6) 將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。
(7)提取蛋白並用於熒光素酶檢測。
(8) 加入底物,測定熒光素酶的活性。
(9) 計算相對熒光強度,並與空載對照比較。
2樓:匿名使用者
啟動子的**
轉錄因子的**
報告基因質粒的構建
實驗方法及結果分析
用生物資訊學方法分析並**啟動子區可能的轉錄因子結合位點。
設計引物用pcr法從基因組dna中克隆所需的靶啟動子片段,將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒(pgl3-basic)中。
篩選陽性克隆,測序。擴增克隆並提純質粒備用。
擴增轉錄因子質粒,提純備用。同時準備相應的空載質粒對照,提純備用。
培養293(或其它目的細胞),並接種於24孔板中,生長10-24小時(80%匯合度)。
將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。
提取蛋白並用於熒光素酶檢測。
加入底物,測定熒光素酶的活性。
計算相對熒光強度,並與空載對照比較。
如何用FITC熒光素標記細菌(細菌,熒光素標記
免疫熒光技術是將熒光素如異硫氰酸熒光素 fluorescein isothiocyanate,fitc 與相應抗體 或抗原 以化學的方法結合,將熒游標記抗體 或抗原 與標本中相應的抗原結合形成熒游標記的抗體 抗原複合物,用熒光顯微鏡觀察。在鏡下見到有熒光存在即推斷有抗原抗體複合物的存在,根據已 知的...
乙肝DNA熒光定量綜合報告單專家幫我看看急急急
只能表明是比較活躍的病毒複製情況,不能說明病情輕重與否,甚至可能不需要 當結合乙肝兩對半 hbvdna 病毒量 b超和肝功能情況,判斷病情,決定 措施。你要注意 肝功輕度異常 不超過正常值上限的2倍 不管大小三陽 只要不是肝硬化,即使病毒量很高,也不需要藥物 注意休息,正常合理的飲食,定期複查非常重...
神經原特異性烯醇化酶和血清骨膠素指數偏高體檢做的查癌指標
重型肝炎肝移植的選擇標準 meld指數 目前世界通用的肝移植時機選擇標準是meld指數。該指數是通過患者年齡 總膽紅素 血清肌酐及凝血酶原時間國際標準比值等指標算出風險指數。它反應肝移植病人在等待肝移植時間內的風險及手術風險的客觀指標。當meld指數 12分,進入等待名單 18 25分,最佳手術時機...