如何用FITC熒光素標記細菌(細菌,熒光素標記

時間 2021-09-04 05:43:03

1樓:

免疫熒光技術是將熒光素如異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,fitc)與相應抗體(或抗原)以化學的方法結合,將熒游標記抗體(或抗原)與標本中相應的抗原結合形成熒游標記的抗體- 抗原複合物,用熒光顯微鏡觀察。在鏡下見到有熒光存在即推斷有抗原抗體複合物的存在,根據已 知的抗體(或抗原)即可推知另一個未知抗原(或抗體)的存在。直接免疫熒光法 直接免疫熒光法是利用熒光色素標記的特異性抗體直接與相應的抗原結合,以鑑定未知抗原。

本法具有操作簡單、時程短、特異性高的優點,但也 存在缺點如不能檢查抗體,敏感性較差。(1)在標本上滴加熒光素標記抗體,放入溼盒中。37℃溫育30min。

(2)pbs 沖洗後,再用pbs分三缸浸泡,每缸3min。(3)pbs浸泡1~2min,風乾。(4)緩衝甘油封片。

在熒光顯微鏡下觀察。進行直接免疫熒光法時應注意:①溫育時一定要將玻片放在溼盒中,以防液體蒸發。

②用pbs浸泡時應不斷振盪。 2. 間接免疫熒光法 間接免疫熒光法以熒光素標記抗球蛋白抗體,抗體與相應抗原結合後,熒游標記的抗球蛋白抗體與已結合的抗體發生作用,從而推知抗原或抗體的 存在。

間接熒光技術可以用已知的抗原檢測未知的抗體,也可用已知的抗體測出未知抗原。現以檢測流行性熱病毒抗體(igm)為例介紹如下:(1)將待測病人血清加至抗原片(流行性熱病毒感染的vero-e6細胞片)上,每個稀釋 度加2孔,最後2孔加pbs做對照。

將玻片放置溼盒中,37℃溫育 60min。取出玻片,棄去反應液,用pbs洗滌5min,風乾。(2)加入1∶40稀釋的fitc標記的羊抗人igm,37℃溫育60min。

取出玻片,按步驟2洗滌,風乾。(3)pbs甘油封片,熒光顯微鏡下觀察。陽性結果:

在細胞膜及細胞質中可見顆粒狀熒光顆粒,細胞核 呈紅色。注意事項:溫育時將玻片放在溼盒中,以防液體蒸發。

選擇低溫、乾燥、潔淨的環境風乾。

2樓:齊嶽蕎麥

推出了一種簡便、廣譜、用於熒游標記不同細菌的方法。我們採用 d-氨基酸綴合熒光素與細菌在生長溶液中孵育,該探針被細菌吸收,通過細胞代謝途徑,共價鍵連線在細菌的細胞壁。

fitc-d-lys 資訊:

fitc-d-lys(圖 1)用於細菌通用熒游標記。激發波長 488 nm、熒光發射 520 nm(綠色)。

如有需要,西安齊嶽生物可以提供不同熒光效能的製劑用於細菌標記(如藍色,紅色熒游標記)。

圖1 fitc-d-lys 結構(分子式:c27h25n3o7s 分子量:535.57)

所需試劑:

無水 dmso、pbs 緩衝液(ph=7.4)、細菌培養液

細菌標記方法:

用無水 dmso 將 fitc-d-lys 配製成 1 mm 的溶液;細菌在 37℃ 培養液中 (lb medium) 生長到 od600=0.6,然後用培養基稀釋為 od600=0.3 將配製好的 fitc-d-lys 溶液加入到上述細菌培養液中並混勻(探針的終濃度為 100 μm),在 37℃ 中孵育 0.

5 h;將細菌培養液離心,並用 pbs 洗 3 次,收集分離得到的細菌並儲存在 ph=7.4 的磷酸緩衝液中;

用共聚焦熒光顯微鏡觀察分離得到的細菌。

熒光素標記的生物素應該用什麼溶解

3樓:匿名使用者

這四個不是一bai

碼事,hrp和ap是酶du,二抗上掛了酶,要給相應的底物才zhi能顯色,顯色方dao式可以通過內發熒光也可以不發熒光(容例如給予ecl底物,其中的h2o2和魯米諾在hrp的作用下,能在黑暗中發出熒光;也可以給予雙氧水和dab,反應產生棕色不溶於水的物質);fitc為異硫氰酸熒光素,本身就是黃綠色熒光,二抗結合後可直接在熒光顯微鏡下觀察;生物素一般也是掛在二抗上的,利用卵白素分別連線生物素標記的第二抗體和生物標記的酶,由酶催化底物,生成終產物,這個終產物也是不溶於水的.

如何用js獲取html元素的標記名

baby 原來 有原生dom獲取以及用js庫比如jquery原生dom的話首先獲取標籤物件,id或者name或其他例 2333333 jquery獲取 content header get 0 tagname 如果已經獲取到物件可以直接獲取標記名 中華人民共和國 用方法getnodename 或者g...

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用顯微鏡觀察細菌步驟如下 先在載玻片上滴加一滴生理鹽水。把菌落用接種環挑起後,塗於生理鹽水 直徑1cm左右要混勻 把載玻片放在酒精燈上加熱烘乾 滴加草酸銨結晶紫60秒 水洗 革蘭氏碘液60s 95 酒精脫色30s 水洗 番紅2分鐘 乾燥鏡檢。最終目的是要在顯微鏡中看見清晰的細菌形狀,所以在染色後脫色...

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青島豐東熱處理 鐵素體因為是單相固溶體,含碳量很低 不超過0.0218 而滲碳體是含6.69 碳的金屬化合物,也是白色的 球墨鑄鐵金相組織中珠光體和鐵素體的區別上什麼 10 日天日地 1 成分不同 珠光體是鐵素體和滲碳體一起組成的機械混合物用符號 p 表示回。鐵素體是碳溶 答解在 fe中的間隙固溶體...