看到了你在知道發的問題,請問你知道怎麼提取細胞培養液裡的分泌

時間 2021-09-02 02:18:34

1樓:匿名使用者

如何濃縮細胞

bai培養液中可du能存在的分泌蛋zhi

白有二種可能性dao:

1.你的細胞裂解和抽提專

過程可能出了問屬題,你的蛋白是分泌蛋白,所以在訊號肽被切掉前(蛋白分泌出細胞前)是嵌入在膜上,如果你使用的抽提液不夠強的話,胞內蛋白可能沒有溶出,而是在細胞碎片上,沒有加入到wb膜上. 你的陽性對照可能本來是個胞內蛋白,所以沒有問題,建議選用一個膜蛋白或其他分泌蛋白作為陽性對照.

2.還有一種可能就是你的蛋白在細胞內的濃度太低,而你的抗體檢測靈敏度不高.

第一種可能性要大.

細胞培養液中蛋白用elisa怎麼檢測

2樓:人蔘__苦短

是細胞分泌的蛋白的話,直接在培養皿中鋪入一定量的細胞,培養3天,細胞達到80-90%時,加藥的時候換無血清培養基,作用完後收集細胞培養上清液,3000rpm,4℃ 離心10min,取上清液。elisa檢測時,不同因子的稀釋度,要事先做個預實驗確定。對照組為新鮮培養液。

3樓:南京金益柏生物科技****

一般來說檢測細胞內的蛋白質需要破碎細胞,非結構蛋白較易提取,破碎細胞後離心取上清即可。而結構性蛋白則需破碎脂膜提取蛋白,具體方法可參照膜蛋白提取的相關文獻。提取的總蛋白需定量,然後以每mg或g的蛋白的相同濃度稀釋後用於測定。

提取時注意要保持低溫及加入必要蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)。

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