1樓:
15ml左右。
細菌培養,平皿中培養基要求完全覆蓋皿底,厚度2-3mm,直徑90mm的平皿,半徑4.5cm,厚度2-3mm,需要的培養基體積v=3.15*4.
5*4.5*0.2(或0.
3)=12.7ml(或19.1ml),因此需要15ml左右,具體厚度需要根據實驗要求酌情增加培養基的倒入量。
倒平板的時候不宜過厚,過厚移菌不好移,容易粘在打孔器上,而其移到下一個培養基上培養條件不同,原培養基太多的話,不利菌適應新的環境,過薄則不利於微生物生長。
擴充套件資料:
培養基配製原則
1、選擇適宜的營養物質
總體而言,所有微生物生長繁殖均需要培養基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源,但由於微生物營養型別複雜,不同微生物對營養物質的需求是不一樣的,因此首先要根據不同微生物的營養需求配製針對性強的培養基。
2、營養物質濃度及配比合適
培養基中營養物質濃度合適時微生物才能生長良好,營養物質濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需,濃度過高時則可能對微生物生長起抑制作用,例如高濃度糖類物質、無機鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進微生物的生長,反而起到抑菌或殺菌作用。
3、控制ph條件
培養基的ph必須控制在一定的範圍內,以滿足不同型別微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的最適ph條件各不相同,一般來講,細菌與放線菌適於在ph7-7.5範圍內生長,酵母菌和黴菌通常在ph4.
5-6範圍內生長。
4、控制氧化還原電位
不同型別微生物生長對氧化還原電位(f)的要求不一樣,一般好氧性微生物在f值為+0.1v以上時可正常生長,一般以+0.3一+0.
4v為宜,厭氧性微生物只能在f值低於+0.1v條件下生長,兼性厭氧微生物在f值為+0.1v以上時進行好氧呼吸,在+0.
1v以下時進行發酵。
f值與氧分壓和ph有關,也受某些微生物代謝產物的影響。在ph相對穩定的條件下,可通過增加通氣量(如振盪培養、攪拌)提高培養基的氧分壓,或加入氧化劑,從而增加f值;在培養基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質可降低f值。
5、原料**的選擇
在配製培養基時應儘量利用廉價且易於獲得的原料作為培養基成分,特別是在發酵工業中,培養基用量很大,利用低成本的原料更體現出其經濟價值。另外,大量的農副產品或製品,如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白腖等都是常用的發酵工業原料。
6、滅菌處理
要獲得微生物純培養,必須避免雜菌汙染,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言,更是要進行嚴格的滅菌。對培養基一般採取高壓蒸汽滅菌,一般培養基用1.
05kg/cm2,121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。
在配製培養基過程中,泡沫的存在對滅菌處理極不利,因為泡沫中的空氣形成隔熱層,使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產生,或適當提高滅菌溫度。
2樓:鈺瀟
大約可以傾注7ml培養基,不過傾注培養基並不需要非常準確,肉眼觀察,傾注培養基時培養基完全覆蓋培養皿底部並且有一定厚度就可以了。
培養基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養物質組合配製而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環境。
培養基由於配製的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮後,易被細菌汙染或分解變質,因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處儲存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基),較長時間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內。
3樓:翰林學庫
一、 培養基的配置:
我們用牛肉膏蛋白腖培養基來培養大腸桿菌.
配置1000ml的培養基(可由教師在實驗前配置好,也可由學生分小組後在實驗課上操作).
1、 配方:
牛肉膏 5g
蛋白腖 10g
nacl 5g
瓊脂 20g
2、稱量:準確稱取各成分.
3、溶化:加熱熔化,用蒸餾水定容到1000ml.整個過程不斷用玻棒攪拌,目的是防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂.
4、調ph:用1mol/l naoh溶液調節ph至7.0——7.2.
5、滅菌:將配置好的培養基轉移到錐形瓶中,加上棉塞,包上牛皮紙,用皮筋勒緊,集中放入高壓滅菌鍋內,121攝氏度、100千帕壓力下滅菌15min.5——8套培養皿用舊報紙包作一包,於乾熱滅菌鍋內160——170℃條件下滅菌2小時.
6、倒平板:滅菌後,待固體培養基冷卻至50℃左右時在酒精燈火焰附近操作進行.
①將滅過菌的培養皿放在火焰旁,右手拿裝有培養基的三角瓶,左手拔出棉塞;②右手拿三角瓶,使三角瓶的瓶口迅速通過火焰;③用左手將培養皿開啟一條稍大於三角瓶口的縫隙,右手將培養基倒入培養皿,立刻蓋上皿蓋;④待平板冷卻凝固後,將平板倒過來放置.
倒過來放置的目的是防止培養基冷卻過程中形成的水滴落到培養基表面.向培養皿中轉移已滅菌的培養基時,也不要把培養基沾在皿壁上.否則,空氣中雜菌會在這些粘附培養基上繁殖,並汙染皿內培養基.
二、 大腸桿菌的接種、培養:
1、接種常用的方法有平板劃線法和稀釋塗布平板法.
(1)平板劃線法:
①操作步驟:將培養皿底部用拇指和無名指固定成傾斜狀態,在火焰旁將培養皿稍微開啟.在此同時,用環狀接種針在火焰旁取少許菌懸液,迅速送入培養皿內,在平板培養基的一邊,作第1次平行劃線 5條,轉動培養皿約70°角,用燒過冷卻的接種針,通過第1次劃線部分作第2次平行劃線,然後再用同樣方法,通過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線.
劃線時,接種針應與平板表面成30°角左右.不要使接種針碰到培養皿邊緣,也不要將培養基劃破.劃線完畢後,蓋上皿蓋,倒置於恆溫箱培養.
②該方法原理及其注意事項:
用接種環蘸菌液後在含有固體培養基的培養皿平板上劃線,在劃線過程中菌液逐漸減少,細菌也逐漸減少.劃線到最後,可使細菌間的距離加大.在培養10~20h後,可由一個細菌產生單菌落,菌落不會重疊.
如果再將每個菌落分別接種至含有固體培養基的試管斜面上,在斜面上劃線,則每個斜面的菌群就是由一個細菌產生的後代.
取菌種前灼燒接種環的目的是消滅接種環上的微生物;除第一次劃線外,其餘劃線前都要灼燒接種環的目的是消滅接種環上殘留菌種;取菌種和劃線前都要求接種環冷卻後進行,其目的是防止高溫殺死菌種;最後灼燒接種環的目的是防止細菌汙染環境和操作者.
(2)稀釋塗布平板法:
先將培養的菌液稀釋,通常稀釋到10-5 10-7之間,然後取0.1ml不同稀釋度的稀釋菌液放在培養皿的固體培養基上,用玻璃刮刀塗布在培養基平面上進行培養,在適當的稀釋度下,可產生相互分開的菌落.通常每個培養皿有20個以內的單菌落最為適合.
將每個菌落分別接種在斜面上擴增培養後,再做功能性實驗.
2、 培養:
將接種後和未接種的培養基都放入37℃恆溫箱中,培養12小時和24小時後,分別觀察記錄結果.
三、 實驗評價相關問題:
1、未接種的培養基是否有菌落?如果有,為什麼?
2、接種了大腸桿菌的培養基上是否有菌落?其顏色、形狀、大小是否相同?
3、如果培養基上出現了不同的菌落,請分析可能的原因.
四、 實驗注意事項:
① 實驗中用的棉花不能用脫脂棉,因脫脂棉易吸水,吸水後容易造成汙染.滅菌後,通常在60~80℃烘箱中除去滅菌時的水分;
② 物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌後,要首先開啟排氣閥,煮沸並排除鍋內冷空氣,其目的是有利於鍋內溫度升高,隨後關閉排氣閥繼續加熱,加熱結束切斷熱源後,要使溫度自然降低,氣壓務必降至零時開啟鍋蓋,其目的是防止容器中的液體暴沸;
③ 在用任何器皿轉接時,瓶塞和封口膜只能夾在手上,不許放在檯面上,接種時要在酒精燈火焰旁操作;
④ 培養基一定不能沾在三角瓶口、試管管口和培養皿壁上,否則容易汙染;
⑤ 接種時要膽大心細,動作快捷,這是減少汙染的關鍵;
⑥ 接種後,培養皿必須倒放(蓋在下方)在恆溫培養箱中,如正放則水蒸氣在蓋上凝成水滴,滴到接種後的培養基表面,水流擴散會使菌落擴散,就很難形成單菌落
細菌培養時為什麼要把培養皿反轉
4樓:
除去冷凝水。
有時凝固後的培養基表面有冷凝水,可將平皿蓋開啟倒置於37℃溫箱,除去冷凝水,否則將影響平板分離培養效果。為防止冷凝水過多,也可將培養基冷卻至45 ~ 50°c再倒平板。
由於細菌無處不在,因此從製備培養基時開始,整個培養過程必須按無菌操作要求進行,否則外界細菌汙染標本,會導致錯誤結果;而培養的致病菌一旦汙染環境,就會引起交叉感染。
擴充套件資料
培養時應根據細菌種類和目的等選擇培養方法、培養基,制定培養條件(溫度、ph值、時間,對氧的需求與否等)。一般操作步驟為先將標本接種於固體培養基上,做分離培養。再進一步對所得單個菌落進行形態、生化及血清學反應鑑定。
培養基常用牛肉湯、蛋白腖、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質配製成液體、半固體、固體等。一般細菌可在有氧條件下,37℃中放18~24小時生長。厭氧菌則需在無氧環境中放2~3天后生長。
個別細菌如結核菌要培養1個月之久。
5樓:之朋桂興生
主要還是減少水分散失,避免培養基的成分(鹽分等)濃度變大,滲透壓發生變化不利於細菌生長。
6樓:匿名使用者
一般培養基中的水分含量、培養溫度一般較高,如果不培養皿翻轉,培養基中的水分會揮發,造成培養基中的水分散失,而且揮發出來的水分會在培養皿蓋子上凝結成水珠,水珠滴落下來,會對菌落生長和菌落形態造成不良影響。
所以為了避免這兩方面的影響應將培養皿翻轉過來。
7樓:匿名使用者
保持溼度,因為要溫室培養,防止水分蒸發~
你老師做實驗的時候沒跟你說嗎?
8樓:年冰菱
防止外來雜菌干擾培養基,倒過來以後不會有灰塵因重力作用落到上面
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