1樓：念影蒹葭
個人建議時間不要再長了，再長蛋白有可能變性造成後續實驗無法進行。我原來遇到這類問題是用以下幾種方法嘗試解決的，你也可以嘗試一下。
1）檢查一下你的三明治結構夾的怎麼樣，尤其是膜及濾紙的邊緣是不是有短接的地方，這個是最容易出現的問題。另外膜和膠之間是不是有氣泡，不推薦用外力去擀壓膜和膠，推薦用緩衝液潤溼膜和膠之後，像做切片蓋蓋玻片一樣從一邊蓋下趕出氣體。要絕對確保沒有短接和氣泡，不然很容易出現轉膜不完全的問題。
2）換成恆壓的試試，這個方案我不知道原理是什麼，但是有的時候確實能夠解決問題。
3）換成半乾轉的方法，但是注意半乾轉更要確保沒有短接氣泡，而且時間不能過長，半乾轉的發熱量很大。我不清楚你的蛋白是不是需要活性，如果遇熱失活那就不能用這種方法。
4）這個方法比較浪費，看老闆讓不讓你用了。換成品緩衝液商品，西格瑪的比較好。另外換24層濾紙成品，用一次不要再使用第二次。
還有就是還一個牌子的膜，我們實驗室曾經遇到過一個牌子的膜完全轉不出來的現象。
以上，希望你的問題早日能夠解決。
2樓：懂得珍惜虓
轉膜時間主要是看分子量，看看你的目的蛋白分子量是多少，還有就是我在轉120kd的分子時，用時2h30min，膠上還有maker，但是用該膜做目的蛋白還是可以的。
求助，western-blot轉膜不成功
3樓：id就是我的名
你確定不是跑膠的時候就是彎曲的？建議下次同時跑兩塊膠，一塊轉膜，一塊考染看看。如果是跑的就是彎曲的，要考慮膠是否均勻，以及拔梳子時是否導致濃縮膠與分離膠平面發生移動等情況。
如果確定是轉膜時導致的條帶彎曲，轉膜時電壓或電流沒控制。
求助western blot 轉膜後條帶會彌散糊成一團，蛋白不齊整
4樓：匿名使用者
確定是轉膜不穩定造成的而不是電泳的問題？電泳後的條帶正常？可能很多原因~轉膜液離子強度不對~轉膜電壓電流不穩定~轉膜儀的問題~一般來說溼轉比半乾轉更穩定一些~只不過時間長~
western blot轉膜時間太長有什麼影響
western blot êôñéöðµ°°×תä¤×üת²»éïè¥
做western blot時為什麼轉膜後膜上沒有蛋白?
5樓：匿名使用者
首先確定電流正負極沒有接反。然後對膠和膜都進行染色，看看是不是有蛋白。同時檢視濾紙上是不是有印。降低電流和/或時間再看看。
6樓：糟油酒丸
只看marker也不可靠吧？還是用ponseau s （麗春紅）給膜上的蛋白質顯色看一下到底如何。
另外膜上沒有marker的話，膠上還看得到marker嗎？如果還在膠上，那麼蛋白質可能也還在膠上，可以改變電流和時間重做一遍。
如果膠上膜上都沒有，那搞不好就跟二樓說的一樣，正負極接反，樣品全跑到緩衝液裡去了。。。
7樓：匿名使用者
沒接電或者正負極接反了～～然後就是轉移盒的正反面弄翻了～～自己看著辦吧～～
western blot實驗怎麼樣轉膜能夠節省時間？
8樓：匿名使用者
轉膜你用的是溼轉的方法嗎？溼轉速度比較慢，一般的半乾轉能快點，30-45min轉完，現在市面上有很多快速半乾轉，3-15min可以完成轉印，可以在轉膜這一步節約一些時間。
我還能想到另外一個可以節約時間的部分，就是檢測，如果以前壓膠片，現在可以考慮用成像儀，這個也可以節省一些時間。
至於抗體孵育的時間，得根據具體情況來看，有些也可以不用過夜，室溫孵育比較快，但是可能效果就沒那麼理想了。
做western blot轉膜時為什麼溫度不能太高
western blot轉膜是怎麼做的？
9樓：網友
蛋白免疫印跡( western blot) 是將電泳分離後的細胞或組織總蛋白質從凝膠轉移到固相支援物nc膜或pvdf 膜上。目前主流方法是電轉印法，分為溼式轉印與半乾轉印。
溼式轉印是將膠塊垂直方向夾在溼式轉印槽內進行電轉印。以e-blotter溼轉槽為例，一般使用垂直電泳槽的緩衝液槽體，將內部垂直電泳電極替換為溼轉的轉印芯，將膠塊、濾紙、轉印棉夾到轉印芯內部，將槽體倒滿緩衝液通電進行電轉印。
半乾轉印是將膠塊水平方向夾在半乾轉印槽內進行電轉印。以yrdimes半乾轉印槽為例，將濾紙、轉印棉用緩衝液浸潤後，與膠塊一起夾到轉印槽內，通電進行電轉印。
一般來說溼轉相對半乾轉印速度上要慢，裝置成本上半乾轉印槽也相對更貴。通常小分子量的蛋白半乾轉效果比較好，大分子量（100kd）以上建議溼轉。
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