1樓：匿名使用者
在現代分析手段中，非常常用的一個檢測儀器。可以比較快速的同時檢測一些物質。可以對物質定性定量的分析，下面是hplc的一些特點：
「三高一廣一快」
①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。
②高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
③高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在ul數量級。
④應用範圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。
⑤分析速度快、載液流速快：較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小於1小時。
此外高效液相色譜還有色譜柱可反覆使用、樣品不被破壞、易**等優點。
2樓：浦恐
高效液相色譜是一個十分有用的物質分離和分析技術。
3樓：浙大智達
很簡單，要是你沒學好的話，不單單是你做不出理想的分析結果，還會對儀器本身造成非常大的傷害，不是嚇唬你，要是操作不當，一次嚴重的違規操作可以造成整臺儀器報廢。
比如：你的流動相中含有緩衝鹽，使用後你沒有清洗系統直接關機，再放置一段時間不去用它。下次使用的時候你直接開機使用，就可能造成整個系統廢掉。
4樓：朦朦的意境
如何使用高效液相色譜(hplc)
高效液相色譜分析儀的作用，和可以分析出什麼來
5樓：千葉雅之
主要是針對有紫外吸收的液體有機物（不飽和的有機物），進行定性和定量分析和純度分析。
定性：就是保留時間的特徵峰。沒辦法分析出物質結構，但是如果已知物質是x，可以對比待測物質和x標準物質。
色譜圖顯示保留時間一致，確定該物質就是x。多用於鑑別試驗中的色譜鑑別。
定量：就是濃度和峰面積成正比。已知物質成分，由標準品的標準曲線計算出待測物質的純度。多用於含量測定。
純度分析：這個是根據波長。在某一特定的波長下注入樣品，根據主成分色譜峰和雜質色譜峰的峰面積粗略判斷物質的純度。多用於有關物質測定。
6樓：樸民化工
分析有機物的含量，純度
高效液相色譜儀的使用和原理分析
7樓：小心_不在犯錯
高效液相色譜儀(hplc)是分析實驗室常用的測試儀器之一，其應用越來越廣泛。此種儀器在使用過程中，難免會出現各種各樣的問題，並將直接影響到所測資料的準確性和儀器的正常工作。操作者如果能瞭解故障的成因，即可清楚預防和排除這些故障的方法，就可正確地使用儀器並最大限度地發揮儀器的效能。
今天我們要從以下幾個方面和您分享下在使用高效液相色譜儀中需注意的幾個問題。
一、使用試管的問題
1、試管的潔淨問題。
高效液相色譜分析法是一個很靈敏的分析方法，如果因使用不潔淨的試管，便會影響試驗結果的準確性。例如，在用甲醇作溶劑來溶解樣品時，所用的小試管是用橡膠塞來做蓋子的，因此，在每次進樣時，都有一個保留時間固定的干擾峰存在，後經證實，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產生，換用玻璃試管後，干擾峰消除。
2、塑料試管的溶解問題。
近年來，一次性塑料試管給試驗人員帶來了極大的方便，但是，在使用過程中一定要注意有機溶劑對試管的溶解現象，在利用此種試管提取樣品時，有些有機溶劑(如氯仿等)對管壁有溶解現象，這些被溶解下來的物質有時也能在檢測器上產生訊號，從而干擾樣品的測定。這時，可用相同的實驗條件先行試驗一下，看看不含被抽提物時，提取液在檢測器上能否產生干擾訊號，如確有干擾訊號存在，就只能換用耐有機溶劑的玻璃試管了。
3、被測樣品在試管壁上的吸附問題。
這個問題也應引起注意，否則也會影響測試結果的準確性，在**藥物監測(therapeutic drug monitoring,tdm)中，有些被測藥物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上，因此，操作中宜採用聚丙烯管，為防止提取中吸附現象的發生，可採用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑，可有效地防止吸附。
二、操作進樣閥的問題
目前，在分析型高效液相色譜儀中常用的進樣閥是7725型進樣閥，其內部的六通閥結構使進樣操作非常方便，但是，如果使用不當，也會帶來問題。例如，在高效液相色譜法的試驗過程中，有時會有異常色譜峰的出現以及重現性不好的問題，這主要是由於操作方法不當所引起，要想解決此類問題，需從以下幾個方面入手。
1、進樣量的控制。
用進樣閥來進樣時，閥內的樣品環是定量的，(一般分析型進樣閥的樣品環體積為20ul)，由於進樣時，注射到進樣閥內的樣品溶液在樣品環的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環中充滿樣品溶液，從而使用進樣閥來準確地定量，則必須使進樣量大於樣品環體積的2倍。如果用注射器來控制進樣量，則最大隻能注射樣品環體積1/2的量，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢位從而導致定量分析的誤差。
2、進樣閥的清潔問題。
如果樣品環中有上次進樣時樣品的殘留，必然會汙染下次注射進的樣品，為防止這種現象的發生，應按下列步驟操作：a.進樣閥有2個位置，inject和load。
首先在load位置時，以注射器將流動相注入進樣閥內清洗幾次，每次用量大約40ul；b.然後將進樣閥板手扳至inject位置時，再以流動相清洗幾次，每次用量還是40ul；c.最後，再將樣品注射到進樣閥裡。
按照上述的步驟操作，可以避免由進樣閥引起的汙染，從而使干擾峰消除並提高分析結果的準確性。
3、進樣閥溢流管的堵塞。
有時，進樣閥的溢流管會發生堵塞現象，向進樣閥內注射樣品時，注射針推不動。此故障是由於溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由於溶解樣品的流動相用的是鹽溶液，而其中的鹽在溢流管的排空埠處結晶所致。
此時，可用小燒杯盛少量蒸餾水對溢流管口稍加浸泡，埠處鹽的結晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次進樣完成之後，用蒸餾水反覆沖洗至溢流管中的鹽分全部衝出，則可避免此故障的發生。
三、流動相(moblle phase)的問題
甲醇和乙腈在高效液相色譜分析法中常常被用來配製流動相。高效液相色譜法中常用的試劑最好是高等級的專用試劑，如色譜純試劑。在要求不太嚴格時，優級純甚至分析純的試劑也能用。
高效液相色譜分析法中常用的是紫外檢測器，因此，從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來考慮，應該使用紫外吸收小且雜質含量少的色譜純試劑。
1、流動相的過濾。
配製好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發現的微小顆粒，如果不把它們濾除掉，就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。
碰到這種情況時，要換用經過濾的流動相，並將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。
2、流動相的脫氣。
流動相在使用前必須脫氣，以儘可能的除去溶解在流動相中的氣體，否則，這些氣體會使柱填料的效能降低，還能夠對檢測器的訊號產生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮氣脫氣等。真空脫氣法和氮氣流脫氣法是目前最常用的脫氣法。
水和甲醇混合後會產生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會進入色譜柱和檢測器，並將影響分析工作的正常進行。
四、色譜柱的使用和保養
色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測物質能否被很好的分離和測定，色譜柱的效能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應特別注意色譜柱的正確使用和維修保養，以延長色譜柱的使用壽命。
1、使用預柱和保護柱。
預柱(pre-column)安裝於泵和進樣器之間，它給色譜柱中的流動相提供了完全的平衡，並防止了對柱填料有破壞作用的組分或汙染物進入色譜柱。保護柱(guard column)可以阻擋能夠牢固地吸附於色譜柱上的組分進入色譜柱，保護柱應與色譜柱的填料相同。預柱和保護柱可以經常更換，而不需要經常更換色譜柱，這就延長了色譜柱的使用壽命。
2、防止氣體進入色譜柱。
有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進入的，否則將會使柱效降低甚至形成微小的難以驅除的氣室。因此，為了防止氣泡進入色譜柱，一定要使用經過脫氣的流動相，並且要嚴格按照下列步驟來安裝色譜柱。a.
拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進入；c.如無溶劑滲出時，表明色譜柱的此端已經進去空氣了，此時，可將色譜柱的出口端接到進樣閥上，以流動相來反方向沖洗色譜柱，以便將柱內的空氣排除。
最好以0.2ml/min的小流量來衝色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導致柱效能的降低；d.如果流出的溶劑裡不含有氣泡，說明柱內的氣體已經被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進不到色譜柱裡面了。
3、色譜柱的清洗。
為了不使被測物質和雜質停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之後，都應及時地清洗色譜柱。首先要用對被測樣品洗脫能力強的溶劑來洗脫色譜柱，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質是極性大的物質，此時應用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內的極性小的物質洗脫下來，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩衝溶液，則應先用蒸餾水來沖洗色譜柱，以沖掉柱內的鹽，然後再用合適的溶劑來沖洗。
凝膠濾過色譜法(gel filtration chromatography)中所使用的凝膠柱常用緩衝溶液做流動相，用完之後當然要用蒸餾水來沖洗。如果是連續操作，可以將緩衝溶液置於柱內過夜，但最好是維持小流速(＜0.5ml/min)以防止緩衝鹽的析出，如果流動相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗乾淨，以防止它們對柱體的腐蝕。
4、色譜柱的存放。
如果色譜柱暫時不用，存放時要注意以下幾點：
a.幾天之內的短期放置，應先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來沖洗)，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
b.如果色譜柱長期不用，僅用上述方法來處理就不行了，這時應使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱則可用正已烷或庚烷，而凝膠柱則不能用水了，因柱內如果有微生物的生長則會使柱效降低，此時應用0.05%的nans水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱，再將色譜柱封嚴。
色譜柱長期放置時，一定要將色譜柱的兩端封嚴，以防止由於溶劑揮發而造成的柱填料幹縮現象，因這可導致柱效的嚴重降低。
c.色譜柱應貯存在室溫下，如果放置於0℃以下的環境裡，柱內就會結冰，這也將導致柱效的降低。
高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀（hplc）一般由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、記檢測系統、資料處理系統等幾部分組成。製備型儀器還需配有餾份收集系統。為了取得較好的分析結果，hplc 儀器對於準確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求。
高效液相色譜儀的工作原理
儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配係數，在兩相中作相對運動時，經過反覆多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電訊號傳送到記錄儀，資料以圖譜形式列印出來。
擴充套件資料：
高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀（hplc）一般由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、記檢測系統、資料處理系統等幾部分組成。製備型儀器還需配有餾份收集系統。為了取得較好的分析結果，hplc 儀器對於準確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求。
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高壓輸液系統
高壓輸液系統包括：溶劑儲液瓶、溶劑脫氣裝置、高壓輸送泵以及梯度洗脫裝置。其中，高壓輸液泵是高效液相色譜儀的主要部件之一，輸送壓力達150—350×105pa。
輸液系統要為hplc儀器提供流量恆定、準確、無脈衝的流動相，流量的精度和長期的重複性要好，同時還要提供精度好、準確度高、重現性好的多元溶劑梯度。因此，輸液泵的好壞直接影響著整個系統的質量和分析結果的可靠性。
進樣系統：進樣能在試樣引入色譜柱，有六個介面：1,4之間接定量環；2接高壓泵；3接色譜柱；5,6接廢液管。
色譜分離系統：色譜柱通常為不鏽鋼柱，內裝各種填充劑。常用的填料為矽膠，可用於正相色譜;化學鍵合固定相，根據鍵合的基團不同，可用於反相或正相色譜。
其中、最常用的是十八烷基鍵合矽膠，即ods柱，可用於反相色譜或離子對色譜。
檢測系統：檢測系統用於連續檢測色譜柱流出的物質，進行定性定量分析。要求其靈敏度高、噪音小、基線穩定、響應值的線性範圍寬等。
近年來各國都在研究開發新的檢測技術，進一步擴大了hplc的應用。
根據檢測需要的不同檢測器可分為紫外檢測器(uvd)、示差折光檢測器(rid)、電化學檢測器(ecd)、紅外檢測器(ird)、核磁共振檢測器(nmrd)、質譜檢測器(msd)、蒸發光散射檢測器(elsd)、小角度鐳射散射檢測器(lallspd)。
資料處理系統：高效液相色譜的分析結果除可用記錄儀繪製譜圖外，還可使用微處理機和色譜資料工作站來記錄和處理色譜分析的資料。
高效液相色譜儀什麼牌子比較好
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