細菌分子鑑定的方法有哪些,菌種鑑定的方法

時間 2021-08-16 04:47:47

1樓:沐楓情

一般從dna、rna和蛋白質這三個方面鑑定。將三種物質分別提取出來,各自進行鑑定。鑑定的方法可以用你提到的這些。

1.核酸雜交:簡單的說,就是將需檢測的核酸與標記的分子結合使得未知核酸可以被檢測到。

2.脈衝場凝膠電泳:利用電場讓不同大小的帶電dna分子以不同的速度移動,從而將不同大小的分子分開。可分離10kb--10mb的dna分子。

3.16s rrna :16s rrna所對應的 16s rdna基因在微生物基因組中具有高度保守性;對16s rdna而言,如果出現3個鹼基以上的差異就可以斷定細菌不屬於同一種屬。

它具有高度的靈敏性,而且不需要培養,檢測指標也很單一。可以快速檢測未知微生物或致病微生物。

4.rapd:對整個未知序列的基因組進行多型性分析的分子技術。先進行pcr擴增,然後電泳分離染色,在紫外***上檢測多型性。

5.質粒質譜分析法:我只瞭解過蛋白質的質譜分析技術,質粒的沒有了解過。

蛋白質:將蛋白質酶解成小肽段並混合基質,用鐳射將呈離子化氣體狀態的待測物噴射,經電場到達檢測器,根據到達的時間分析肽段的分子質量。

2樓:郯飇

細菌對大分子的澱粉、蛋白質和脂肪不能直接利用,必須靠產生的胞外酶,如我剛剛參加了這方面的培訓呢,呵呵。一般細菌的常見生理生化鑑定實驗有:糖(

菌種鑑定的方法

3樓:匿名使用者

傳統方法細菌做bai

革蘭du氏染色 運動性試zhi驗 各種代謝 然後查伯傑氏細菌手dao冊;用分回子做的話答提總dna,pcr擴增16srdna全長片段,上ncbi資料庫比對,選擇近緣序列構建系統發育樹鑑定。

真菌的話主要根據形態,特別是有性型生殖形態鑑定;分子的話一般擴增its區域,比對,建樹鑑定。

4樓:美吉生物

首先你要復確定待鑑定的菌種一定製是純種 。如果菌種不純,所觀察到的現象則是混合現象,這樣自然不會得到正確的結果。因此在鑑定之前,首先要將菌種純化。

純化方法,一般有2種:平板劃線單菌落分離法和單細胞分離法。前一種操作簡便,效果良好,適用範圍廣。

菌種鑑定的方法一般有常規鑑定和分子生物學方法:

(1)常規鑑定:菌落形態觀察、革蘭氏染色、菌毛染色、糖類分解實驗、吲哚實驗、澱粉水解實驗、v-p實驗、甲基紅實驗、檸檬酸鹽利用實驗、硝酸鹽還原實驗、接觸酶實驗等

(2)分子生物學方法:細菌16srdna菌種鑑定:提取dna,特定引物pcr擴增,pcr產物純化測序,進化樹分析;真菌18s rdna/its菌種鑑定流程也是一樣的。

哪些分子生物學技術被用於對細菌的分類,鑑定

5樓:

1、細菌常規鑑定方法

1. 1 免疫診斷技術

1. 1. 1凝集試驗

目前常用的是葡萄球菌協同凝集試驗(spa - coa) ,金黃色葡萄球菌細胞壁的a 蛋白(spa) 能與動物血清中igg的fc 結合,成為致敏的顆粒載體,特異性igg的fc 與spa 結合後, f (ab’) 2 段暴露在葡萄球菌表面,與相應細菌反應呈現凝集現象,此法用於細菌快速鑑定和分型。

1. 1. 2免疫酶技術

免疫酶技術( eia , enzymeimmunoa2ssay) 是將酶標記的抗抗體與抗原—抗體複合物結合形成抗原- 抗體- 酶標記抗抗體複合物,加入酶底物產生有色產物。以酶聯免疫吸附測定( elisa) 和斑點酶聯免疫吸附技術(dot - elisa) 應用較廣泛。

1.1. 3 免疫熒光技術

免疫熒光技術( fia , fuorescenceimmunoassay) 是將一抗滴加於待檢抗原上,再加一抗的熒光抗體(二抗) ,呈現特異性的熒光抗原抗體複合物以鑑定病原菌。此法比elisa 更直觀,可直接觀察到菌體形態。

1. 1. 4放射免疫測定技術

放射免疫測定( ria , rad2ioimmunoassay) 是用放射性同位素標記抗原或抗體,與相應的抗體或抗原結合後通過放射自顯影定性和定量抗原或抗體。

1. 1. 5免疫膠體金標記技術

膠體金是繼酶、熒光素和放射同位素後免疫標記技術中令人矚目的新標記物。膠體金是氯金酸(haucl4)在還原劑如白磷、枸櫞酸鈉等的作用下,聚合成特定大小的金顆粒,通過靜電作用與抗體或抗原形成一種穩定的膠體狀態,即為免疫金,免疫金與相應的抗原抗體結合後,呈現特定的顏色反應。

1. 2  蛋白質圖譜分析

蛋白質圖譜分析主要採用聚丙烯醯胺凝膠電泳( page,polyacrylamide gel electrophoresis)和sds -page。聚丙烯醯胺凝膠是單體丙烯醯胺(acr) 和

n ,n’- 亞甲雙丙烯醯胺(bis) 在催化劑過硫酸銨和加速劑四甲基乙二胺(temed)作用下聚合為含醯胺基側鏈的脂肪族長鏈,相鄰長鏈通過甲叉橋連線形成三維網狀結構物質,page 根據電荷、形狀和分子大小分離和定性、定量分析蛋白質和多肽。sds - page 根據分子量的不同分離蛋白質,sds 是一種陰離子表面活性劑,與蛋白質疏水部分結合使蛋白質帶大量負電荷且使蛋白質的形狀趨向一致,抵消了蛋白質本身所帶電荷和形狀的影響,因此,樣品分子量的對數與其在凝膠中的遷移率呈直線關係。

詳見 http://epub.cnki.net/kns/brief/default_result.aspx

6樓:匿名使用者

pcr鑑定技術、snp分析、基因組測序等

哪些分子生物學技術被用於對細菌的分類,鑑定

7樓:桐薇

dna-dna雜交,該技術被認為是細菌分類和鑑定的“**法則”,主要方法如下:標記法、吸光度法、熒光強度法等。

16srrna法:細菌核糖體的rna有三種型別,(23s、16s、5s)rrna,其中16s被認為作為生物系統發育和分類指標最為合適。

細菌核心基因(看家基因),包括gyrb、rpob、groel、recn等。

細菌鑑定的傳統方法與分子生物學法的比較

8樓:匿名使用者

細菌傳統鑑bai定是指形du態觀察、生理生化測定等zhi,複雜,但較準確。dao分子生物學

回常用的是16srdna鑑定,這個只能堅

答定到屬,要堅定到種還是得做生理生化實驗,這是經典的分類方法,比較方便快捷的是先16s鑑定大概確定下,然後用生理生化確定微生物種的分類。

怎麼做菌種鑑定,菌種鑑定的方法

欒曼安 傳統方法細菌做革蘭氏染色 運動性試驗 各種代謝 然後查伯傑氏細菌手冊 用分子做的話提總dna,pcr擴增16srdna全長片段,上ncbi資料庫比對,選擇近緣序列構建系統發育樹鑑定。真菌的話主要根據形態,特別是有性型生殖形態鑑定 分子的話一般擴增its區域,比對,建樹鑑定。菌種鑑定的方法 傳...

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