怎麼看WB安全這個問題

時間 2021-09-07 15:17:02

1樓:陳新亮的雲盤

wb中常見問題和解決方法

1.電泳中常出現的一些現象: ●︶ 條帶呈笑臉狀 原因:凝膠不均勻冷卻,中間冷卻不好; 電泳系統溫度偏高。

●︵ 條帶呈皺眉狀 原因:可能是由於裝置不合適,特別可能是凝膠和玻璃擋板底部有氣泡,或者兩邊聚合不完全。 ●拖尾 原因:

樣品溶解不好。 ●紋理(縱向條紋) 原因:樣品中含有不溶性顆粒。

●條帶偏斜 原因:電極不平衡或者加樣位置偏斜。 ●條帶兩邊擴散 原因:

加樣量過多。 2.western blot 結果中背景較高 可能的原因及建議: ●膜封閉不夠 延長封閉的時間;選擇更加適合的封閉液。

●一抗稀釋度不適宜 對抗體進行滴度測試,選擇zui適宜的抗體稀釋度。 ●一抗孵育的溫度偏高 建議4℃結合過夜。 ●選擇的膜容易產生高背景 一般硝酸纖維素膜的背景會比 pvdf 膜低。

●膜在實驗過程中幹過 實驗過程中要注意保持膜的溼潤。 ●檢測時**時間過長 減少**時間。 3.western blot 結果中雜帶較多 可能的原因及建議:

●目的蛋白有多個修飾位點(磷酸化位點、糖基化位點、乙醯化位點等),本身可以呈現多條帶。 查閱文獻或進行生物資訊學分析,獲得蛋白序列的修飾位點資訊,通過去修飾確定蛋白實際大小。 ●目的蛋白有其它剪下本 查閱文獻或生物資訊學分析可能性。

●樣本處理過程中目的蛋白髮生降解 加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作。 ●上樣量過高,太敏感 適當減少上樣量。 ●一抗特異性不高 重新選擇或製備高特異性的抗體。

●一抗不純 純化抗體 ●一抗或者二抗濃度偏高 降低抗體濃度。 4 . western blot 結果中無訊號或顯示訊號弱 可能的原因及建議:

●檢測樣本不表達目的蛋白 選擇表達量高的細胞作為陽性對照,用於確定檢測樣本是否為陰性。 ●檢測樣本低表達目的蛋白 提高上樣量,裂解液中注意加入蛋白酶抑制劑。 ●轉移不完全或過轉移 可以用麗春紅染膜並結合染膠(考馬斯亮藍)後確定條帶是否轉至膜上或轉移過頭;適當調整轉膜的時間 和電流。

●抗體不能識別測試種屬的相關蛋白 購買抗體前應當認真閱讀抗體說明書,確定其是否能夠交叉識別測試種屬的對應蛋白。 ●一抗孵育時間不足 建議4℃結合過夜。 ●二抗與一抗不匹配 選擇針對一抗**的種屬的抗體。

●洗膜過度 洗膜時間不宜過長,加入的去垢劑不宜過強或過多,建議使用0.1%的弱去垢劑 tween

2樓:琦紫瓊

不安全 聽說被關停了

這個古典吉他譜怎麼看,這個吉他譜怎麼看

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這男人,你們怎麼看,這個男人 你們怎麼看。

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一般都是4個黑的4個紅的。你加怎麼3個紅色指標。不過紅色的不用管首先x1代表數字的個位 黑的表的數字x1檔是9 所以這個讀數的個位就是9 x10代表數字的十位 黑的表的數字x10是3 所以這個讀數的十位是3 x100代表數字的百位 黑的表的數字x100是9 所以這個讀書的百位是9 x1000代表數字...