1樓:剛剛跟v尺寸
1.普通內參:當目的蛋白的分子量大小與選用的內參蛋白分子量相差不大時,可以先進行目的蛋白的抗體溫育顯色和檢測。
然後使用strip緩衝液洗掉膜上的抗體,重新進行內參蛋白的抗體溫育、顯色檢測。
2.當目的蛋白的分子量大小與選用的內參蛋白分子量大小相差比較明顯情況下,可以在轉膜後預染,根據蛋白質marker的大小將膜剪為大分子量和小分子量兩部分,使內參蛋白與目的蛋白分開。然後兩塊膜分別與內參蛋白抗體以及目的蛋白抗體進行溫育,二抗溫育以及顯色。
3. 超級簡便的標記內參使用法:只要在二抗孵育時加入hrp標記內參抗體,按照正常操作即可。
要用western blot比較不同條件下或者不同組織中,目的蛋白表達量的相對多少,前提條件是等量的細胞上樣,才有比較的基礎。特別表達量不高時,上樣量的差別就很可能影響結果的分析。所以你需要內參。
內參即是內部參照,對於哺乳動物細胞表達來說一般是指由管家基因編碼表達的蛋白,它們在各組織和細胞中的表達相對恆定,在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。在western blotting 實驗中,除了需要進行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上樣電泳、轉膜、靶蛋白抗體孵育、顯色等步驟以外,還需要進行內參的檢測,以校正蛋白質定量、上樣過程中存在的實驗誤差,保證實驗結果的準確性。
a-rfs-h-004阿克拉黴素阿克拉黴素a、阿柔比星、安樂黴素aclarubicin57576-44-0≥
a-rfs-h-005氨苄青黴素氨苄西林三水酸、氨苄青黴素三水酸、三水氨苄西林、三水合氨苄青黴素、水合氨苄青黴素ampicillin7177-48-2≥
a-001阿魏酸松柏酯coniferyl ferulate63644-62-2>98%hplc
a-002阿魏酸4-羥基-3-甲氧基桂皮酸、4-羥基-3-甲氧基肉桂酸4-hydroxy-3-methoxycinnamic acid1135-24-6>98%hplc
a-009澳洲茄胺茄解啶、澳洲茄次鹼;茄解定solasodine126-17-0>98%hplc
a-014阿卡波糖抑葡萄糖苷酶acarbose56180-94-0>98%hplc
a-015安五脂素anwuligan107534-93-0>98%hplc
a-016安格洛苷c安格洛甙 cangoroside c115909-22-3>98%hplc
2樓:啦付付付
western blotting 實驗過程中使用內參的方法通常有一下三種。第一種是。
超級簡便的標記內參使用法,只要在二抗孵育時加入 hrp 標記內參抗體,按照。
正常操作即可:第二種是普通內參,當目的蛋白的分子量大小與選用的內參蛋白。
分子量相差不大時,可以先進行目的蛋白的抗體溫育顯色和檢測,然後使用 strip
緩衝液洗掉膜上的抗體,重新進行內參蛋白的抗休溫育、是任檢測。第三種,目的蛋白的分子量大小與選用的內參蛋白分子量大小相差比較明顯情況下,可以。
在轉膜後預染,根據蛋白質 marker 的大小將膜剪為大分子量和小分子量兩部分。
使內參蛋白與目的蛋白分開,然後兩塊膜分別與內參蛋白抗體以及目的蛋白抗體。
進行溫育,二抗溫育以及是色。
3樓:網友
內參配製方法是全域性法。內參配製方法是非常非常複雜的。需要先對內參的引數進行詳細的解讀,才能對其進行配製,所以方法是全域性法。
4樓:匿名使用者
製作方法:烏龜過水,下鍋燒入味,加白酒收汁;五花肉紅燒,切成方塊;上海青墊底,擺盤即可。內參酒美味時刻:肉製品是少不了要去腥提鮮的。
水楊酸配製方法,水楊酸配製方法
水楊酸 0.5g 硬脂酸 4.8g 單硬脂酸甘油酯 1.4g 白凡士林 1.2g 液體石蠟 1.0g 甘油 1.2g 十二烷基硫酸鈉 0.1g 尼泊金乙酯 0.01g 蒸餾水 40g 製備方法 1 方法選擇 乳化法 2 製備過程 稱取水楊酸 研細備用。將硬脂酸 單硬脂酸甘油酯 液體石蠟 白凡士林共置...
配製碘水的試劑的方法,碘試劑配製的具體方法
取一定質量的碘,碘化鉀,及相應體積的乙醇,加水適量 步驟 將碘化鉀先加一定的水溶解後,再加入碘和乙醇,攪拌使之溶解,再加水適量定容至需要的體積,即可製得 稱取分析純碘片6.5g,放於小燒杯中,另外稱取固體ki18.5g,並先把碘片溶解於少量酒精中,再加入水到100毫升,攪拌均勻即可。碘水按國家醫療熱...
western blot內參和marker的區別
看到你的目的蛋白條帶在30和35kd之間,就可以初步斷定是你的目的蛋白。2.內參呢,內參也叫看家基因,在組織或細胞中都會表達,且表達量在不同組織或細胞中幾乎是相同的,一般有 actin,gapdh等。其作用有二,1.是看提取蛋白質量的好壞。如果做western的時候,內參照蛋白有條帶,而目的蛋白沒有...