小鼠成纖維細胞株L929的培養方法

時間 2023-09-30 10:42:40

1樓:匿名使用者

rpmi 1640培養基,小牛血清,抗生素(青黴素和鏈黴素)胰蛋白酶,pbs,edta

消化細胞並接種,放入培養基,37度培養,隔天即可觀察。培養液變黃時需換液。

2樓:雲和楊的日子

採用dmem加10%小牛血清培養,效果不錯!

3樓:dc身正不怕惱子汙

拿到小鼠成纖維細胞後先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,去掉封口膜並將t25瓶置於37℃培養約2-3h。

小鼠成纖維細胞。

培養步驟。一.培養基及培養凍存條件準備:

1) 準備mem培養基。

馬血清10%;雙抗,1%。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%dmso,現用現配。

二. 細胞處理:

1) 復甦細胞:將含有1ml細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4ml培養基混合均勻。在1000rpm條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2ml培養基後吹勻。

然後將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液並檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的pbs潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液( edta)於培養瓶中,置於37℃培養箱中消化1-2分鐘,然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓並脫落,迅速拿回操作台,輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻後吸出,在1000rpm條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2ml培養液後吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。

4樓:三甲腎內科周琪醫生

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這裡哪行。成纖維細胞還是非常好養的。

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