1樓：魔幻小子
我現在做原核表達一個融合蛋白，其中單鏈抗體基因是合成的（根據大腸桿菌的密碼子偏愛性設計的），表達載體是pet和pgex，做了幾次表達好象蛋白都行成包涵體。
我想請教的問題是：
一 如何判斷是不是形成包涵體，我們實驗室那個破超聲波破碎儀壞了，再沒有超聲波破碎儀的情況下如何破碎菌體，我配了下面二種裂解液。
裂解液的成分：50mmtris-hcl, ,2mm edta，100mm nacl，加溶菌酶至100ug/ml， x-100
裂解液：50mm tris-hcl(, 2mm edta, 100mm nacl, triton x-100, 1mg/ml
再一起用我們那個破破碎儀超但根本打不動，最後我就用反覆凍融法把其中二個在（37和-20反覆凍融）感覺也不行，請問大俠們，你們是如何破碎菌體的，反覆凍融該怎麼搞了？我看別人判斷破碎是不是完全的標準是： 1，外觀判斷：
超聲前菌懸液是渾濁的，超聲完全後變的透明、清澈。
這一項是一個比較常用的方法，以前我的師姐也這麼告訴我的，但我超一個小時還沒有透明？
2，液體的粘滯性：超聲後菌液從槍頭滴下不粘連。
這一項跟沒有看到粘滯性，是不是我破碎時加的液體太多了，大家在超聲時加什麼緩衝液？比例是多少？
3，高速離心：有用高速離心檢測超聲破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般離心收集菌體的轉速高一點）。 沉澱是未破碎或破碎不完全的菌體。
高速離心檢測時6,000 g是不是轉速太低了，我們以前都20000g，離心後再跑膠檢測？
4，染色：破碎後的菌液塗片，革蘭氏結晶紫溶液染色分鐘，鏡檢。
染色後看什麼樣的結果說明破碎完全了？
二 我在做原核表達時，表達載體是pet和pgex，表達條件是：
誘導溫度37度 [iptg]= 時間是3h
表達後檢測是包涵體。
怎麼搞才能使蛋白形成可容性的蛋白？
下面的方法哪個更有效一些：
1 降低表達溫度。（20-30度表達）
2 增加誘導時細菌密度。（od大於。
3 降低表達啟動溫度。（先將菌株冷至20度左右再誘導）
4 降低誘導劑的濃度。（如iptg可小於。
5 增加通氣。（培養瓶中放入1/3左右的培養基，猛烈搖動，增加氧含量，抑制包涵體形成）
6 減少誘導時間。（2-4小時。
2樓：網友
細菌有堅硬的細胞壁，首先要破碎經胞。方。
法有三種：①機械方法：超聲波處理法、研磨法、勻漿法；②化學試劑法：用sds處理細胞； ③酶解法：加入溶菌酶或蝸牛酶，都可使細胞壁破碎。
由於高等動物dna 主要存在於細胞核與線粒體中，所以提取時有兩個困難（高等植物與此類似）：
①破碎細胞難；從處死動物٠分離組織器宮到破碎細胞費時長。在此時期間dna 可能會被dn ase降解，而動物組織：特別是肌肉組織很難破碎，即使是較易破碎的肝٠腎等組織也往往使用組織勻漿器，易造成dna 斷裂。
②分子量大，一般比細菌的大2—3個數量級，比病毒的大4—5個數量。對不同生物材料，要根據具體情況選擇適當的分離提取方法。
求助用超聲波打斷基因組dna
3樓：楊風遊
1。從培養的菌液中提取足夠你用的基因組dna,儘量要抽提的純點並儘可能減少機械力對染色體完整性的破壞。
2。超聲的條件主要取決於你的基因組或質粒的g+c含量和你所需片段的大小。一般來說如果你的基因組g+c含量在50%左右，80w*2sec*3次，間歇5秒，可讓你得到5-15k的片段，若要減小片段長度，可增加超聲時間（3sec）或次數（如4次），另外g+c含量越小，則功率也要相應減小，間歇時間延長。
超聲裂解細胞會破壞蛋白和dna作用嗎
4樓：smile我的愛人
超聲裂解細胞的作用原理就是對細胞膜的裂解，一般超聲波的頻率大小會對不同的物質產生不一樣的作用，比如一般裂解細胞的和裂解dna的超聲波頻率不一樣，你這裡說的是會對蛋白和dna產生一定程度的影響的。
超聲波 片段化dna 優缺點？
5樓：鍾瑪
超神魔片的瓦板的優缺點，自己去搜一下。
6樓：ydm開心
超聲多片段化，第二有缺點你可以瞭解就明白他這裡頭都有什麼優點和缺點。
超聲波清洗機可以破碎細胞嗎
為什麼機械破碎法不能用於基因組dna的提取
超聲波破碎儀中超聲波發生器的工作原理是什麼
小四偶巴 將電能通過換能器轉換為聲能，這種能量通過液體介質而變成一個個密集的小氣泡，這些小氣泡迅速炸裂，產生的象小炸彈一樣的能量，從而起到破碎細胞等物質的作用.超聲波細胞破碎儀由超聲波發生器和換能器兩大部分組成 有的配置有隔音箱 1 超聲波發生器 由訊號發生器來產生一個特定頻率的訊號，這個特定頻率就...
超聲波療法有用嗎？超聲波加溼器有用嗎？
超聲波 是現在比較先進的一種 對心臟病等情況相當不錯。我家裡就有一款超聲波理療儀，守衛者超聲波理療儀，家裡心臟病人日常就是用這個，主要是持續修復心肌細胞，擴張冠狀動脈，增加人體供血供氧，修復心肌細胞，清理血液垃圾，冠心病患者用這個特別好。超聲波加溼器有用嗎？有用。1 主要的作用是維持室內空氣溼度，如...
超聲波真的有那麼大能量嗎 超聲波有多大的能量？
1.超聲波是指頻率高於20000赫茲 hz 的一種人無法聽見的聲波。人耳朵能聽到的聲波頻率為20 20000hz，當聲波的振動頻率大於20000hz時，人耳無法聽到。超聲波因其頻率下限大約等於人的聽覺上限而得名。因此，我們把頻率高於20000赫茲的聲波稱為 超聲波 2.超聲波是一種機械波，機械振動與...