1樓:匿名使用者
一般培養的懸浮細胞的確容易出現這個情況。我養過的懸浮細胞種類不多,就個人經驗而言。
1.從復甦細胞開始,要了解細胞的生長週期,尤其是出現指數生長期的時間段。儘量將細胞控制在一個合理的培養階段,不要貪圖省力貿然將細胞培養密度調小,或者認為過一個週末多個半天不處理也沒有關係;除非你已經做過生長週期的確認;
2.有些懸浮細胞在平面培養環境中,會貼服在培養表面,雖然不會像貼壁細胞一樣,但也不容易飄起來,但是在不斷傳代中會出現貼壁越來越差的情況,這個時候需要小心控制,僅保留貼壁的細胞傳代,這樣細胞就可以棄上清處理,死細胞或者分化的細胞就可以去掉
3.控制傳代次數,復甦與凍存的記錄要清楚,否則細胞狀態很不穩定。
4.分化過程中如果出現過多的變異細胞,尤其是演變成完全貼壁的細胞(出現類偽足),建議不要用了,重新復甦。
一般這樣處理的細胞的培養液還是比較乾淨的。個人實驗經驗,僅供參考。
如何去除懸浮細胞中的死細胞
2樓:郭敬明公積金
將培養bai瓶豎立放一段時間(50min左右du),然後用吸管輕zhi輕吸取dao
上面1ml的細胞懸專液,移入另一個新屬
的已加培基的培養瓶中。
或者ficoll分離,就像分離pbmc一樣,先把細胞混勻,然後小心緩慢地把細胞加入到ficol中,1000g離心20分鐘,收集位於ficoll和培養基之間的透明層,即為你的活細胞,這是在存在大量死亡細胞的時候採用,如果死亡細胞不是特別多的話,換液勤一點。
3樓:北京索萊寶科技****
將培養瓶豎立放一段時間(50min左右),然後用吸管輕輕吸取上面1ml的細胞懸液,移入另一個回新的已加培基的答培養瓶中。
或者ficoll分離,就像分離pbmc一樣,先把細胞混勻,然後小心緩慢地把細胞加入到ficol中,1000g離心20分鐘,收集位於ficoll和培養基之間的透明層,即為你的活細胞,這是在存在大量死亡細胞的時候採用,如果死亡細胞不是特別多的話,換液勤一點。
(僅供參考)
4樓:匿名使用者
可以試驗一下以bai下方法:1稀釋法。細du
胞稀釋後還能增殖
zhi,會越來越多,而細胞dao碎片相應地會越內來越少。2.自然容沉降法。
將細胞懸液移到離心管中,等細胞大部分下沉時,可將上液吸棄,再加入培養液懸浮細胞,此方法可反覆使用,同時每次可顯微鏡下觀察是否符合你的要求。
5樓:匿名使用者
使用maglive dead cell removal kit
懸浮細胞如何去除死細胞
6樓:北京索萊寶科技****
將培養瓶豎立放一段時間(50min左右),然後用吸管輕輕吸取上面1ml的細胞懸液,移入另一個新的已加培基的培養瓶中。
或者ficoll分離,就像分離pbmc一樣,先把細胞混勻,然後小心緩慢地把細胞加入到ficol中,1000g離心20分鐘,收集位於ficoll和培養基之間的透明層,即為你的活細胞,這是在存在大量死亡細胞的時候採用,如果死亡細胞不是特別多的話,換液勤一點。
(僅供參考)
7樓:奕德雪衣
可以試驗一下以下方法:1稀釋法。細胞稀釋後還能增殖,會越來越多,而細胞碎片相應地會越來越少。
2.自然沉降法。將細胞懸液移到離心管中,等細胞大部分下沉時,可將上液吸棄,再加入培養液懸浮細胞,此方法可反覆使用,同時每次可顯微鏡下觀察是否符合你的要求。
如何去除轉染後懸浮細胞中的死細胞
8樓:福梓維塗昭
將培養瓶豎立放一段時間(50min左右),然後用吸管輕輕吸取上面1ml的細胞懸液,移入另一個新的已加培基的培養瓶中。
或者ficoll分離,就像分離pbmc一樣,先把細胞混勻,然後小心緩慢地把細胞加入到ficol中,1000g離心20分鐘,收集位於ficoll和培養基之間的透明層,即為你的活細胞,這是在存在大量死亡細胞的時候採用,如果死亡細胞不是特別多的話,換液勤一點。
(僅供參考)
9樓:溫墨徹堅亥
懸浮細胞的轉染方法:(以下內容**生物幫資訊)
dxy721認為:
懸浮細胞和貼壁細胞在轉染過程中差別不大,主要差別在於轉染後的篩選,當然如果你做的是瞬時轉染就不存在篩選的問題了。
其實轉染的過程很簡單,問題是能不能轉的進去的,轉染率能有多少,轉進去是否可以穩定表達目的蛋白等等。
我們也是用脂質體做懸浮細胞的轉染,說明書上都有具體的操作過程,將脂質體和目的基因按比例混合,然後加到細胞懸液裡就ok了,說的簡單,實際上還是有一些細節要注意的,比如脂質體和目的基因混合的比例,轉染的細胞數,細胞的代數,細胞的狀態,有的還要求在轉染的前一天傳代一次,不過不要怕,這些在脂質體說明書上都有明確的說明,按照說明書做就可以了。
jinghuanlv認為:
懸浮細胞和貼壁細胞轉染還是有很大不同的。
脂質體轉染的原理基於電荷吸引原理,先形成脂質體-dna複合物,散佈在細胞周圍,然後通過細胞的內吞作用,將目的基因匯入細胞內,而脂質體複合物與貼壁細胞的接觸機會比懸浮細胞高出很多倍,所以,脂質體轉染時懸浮細胞的轉染效率要明顯低於貼壁細胞。
我們實驗室轉染懸浮細胞是用的電穿孔法,目前為止,懸浮細胞轉染的最好方法還是電轉,我們實驗室用的電轉儀是bio-rad的,使用條件是電壓250v,電容975uf,效果不錯,不妨一用。
如何去除轉染後懸浮細胞中的死細胞
10樓:匿名使用者
將培養瓶豎立放一段時間(50min左右),然後用吸管輕輕吸取上面1ml的細胞懸液,移入另一個新的已加培基的培養瓶中。
或者ficoll分離,就像分離pbmc一樣,先把細胞混勻,然後小心緩慢地把細胞加入到ficol中,1000g離心20分鐘,收集位於ficoll和培養基之間的透明層,即為你的活細胞,這是在存在大量死亡細胞的時候採用,如果死亡細胞不是特別多的話,換液勤一點。
(僅供參考)
如何判斷懸浮細胞培培養時,細胞是死的還是活的
11樓:操晴嵐索騫
如何判斷懸浮細胞培培養時,細胞是死細胞還是活細胞:
死亡細胞分為壞死和凋亡,兩種死亡方式的形態結構不相同:
壞死主要是致**素引起的,凋亡屬於細胞程式性死亡。
壞死細胞先後出現:核固縮,核碎裂,核溶解,細胞嗜酸性增強,胞膜破裂,細胞內容物彌漫出來,屬於酶融性死亡。
凋亡細胞的特點是出現凋亡小體(有完整細胞膜),細胞內物質沒有露出,最後被吞噬細胞吞噬。
正常細胞肯定會有完整的細胞核,以及各種正常細胞器。
正常細胞鏡下觀察形態分明,飽滿透亮,死亡細胞會皺縮破損,暗淡。
懸浮細胞培養如何去除死細胞
如何去除懸浮培養細胞中的死細胞
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