1樓：匿名使用者
溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物。擴增反應完成後，通過逐漸增加溫度同時監測每一步的熒光訊號來產生溶解曲線，隨著反應中雙鏈dna變性，熒光染料又回覆到遊離狀態導致熒光訊號降低，用熒光訊號改變的負的一次導數與溫度作圖，在擴增產物的溶解溫度上有一特徵峰（tm，dna雙鏈解鏈50％的溫度），用這個特徵峰就可以將特異產物與其它產物如引物二聚體區分開，因為它們在不同的溫度溶解.
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！
因為syby green染料是非特異的染料，只要有擴增，染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰，且出鋒位置是你的退火溫度，那麼這個是你的產物發出的熒光，實驗結果有效。
如果出現多鋒或退火溫度不對，那麼這個實驗結果是不可信的！你需要再次調整！
2樓：
擴增反應完成後，對pcr產物加熱，隨著溫度的升高，雙鏈擴增產物逐漸解鏈，導致熒光強度下降，到達某一溫度（即tm）時，會導致大量的產物解鏈，熒光急劇下降。利用該特點以及不同pcr產物其tm值的不同，因此使其熒光訊號發生迅速下降的溫度也不同，可通過此對pcr產物的特異性進行鑑定。
什麼是realtime-pcr溶解曲線
3樓：匿名使用者
如圖所示，這就是一個標準的real time-qpcr溶解曲線。下面從幾個方面來解讀：1、隨著溫度的升高，dna雙鏈斷裂；接著溫度降低，到達退火溫度的時候，dna雙鏈復性，熒光分子繫結在dna雙鏈上，所以熒光訊號值到達最高點。
上面的是反映在擴增曲線上面的。2、接著dna雙鏈分子由退火溫度約60度，繼續升溫，雙鏈斷開，dna分子溶解。請注意溶解曲線的縱座標，表示單位時間內熒光訊號的變化量。
當擴增產物特異，是單一產物的時候，這個縱座標峰值所對應的橫座標應該是一致的，即呈現單一的溶解峰，這個時候，在同樣的溫度下，可以認為是產物相同；如果溶解峰不單一，就意味有非特異性擴增。
4樓：匿名使用者
溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物。擴增反應完成後，通過逐漸增加溫度同時監測每一步的熒光訊號來產生溶解曲線，隨著反應中雙鏈dna變性，熒光染料又回覆到遊離狀態導致熒光訊號降低，用熒光訊號改變的負的一次導數與溫度作圖，在擴增產物的溶解溫度上有一特徵峰（tm，dna雙鏈解鏈50％的溫度），用這個特徵峰就可以將特異產物與其它產物如引物二聚體區分開，因為它們在不同的溫度溶解.
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！
因為syby green染料是非特異的染料，只要有擴增，染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰，且出鋒位置是你的退火溫度，那麼這個是你的產物發出的熒光，實驗結果有效。
如果出現多鋒或退火溫度不對，那麼這個實驗結果是不可信的！你需要再次調整！
什麼是pcr熔解曲線法
5樓：隔間望月
pcr熔解曲線分析法是做realtime-pcr時分析，用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物的分析方法。原理是在擴增反應完成後，通過逐漸增加溫度的同時監測每一步的熒光訊號來產生溶解曲線，隨著反應中雙鏈dna變性，熒光染料又回覆到遊離狀態導致熒光訊號降低，用熒光訊號改變的負的一次導數與溫度作圖，在擴增產物的溶解溫度上有一特徵峰（tm，dna雙鏈解鏈50％的溫度），因為它們在不同的溫度溶解，所以用這個特徵峰就可以將特異產物與其它產物如引物二聚體區分開。
我的回答不知道對你是不是有參考作用。
你好，我想請問你關於real-time pcr 中溶解曲線的橫軸和縱軸的意義？
6樓：匿名使用者
橫座標是溫度，每個溫度點一個。一般從60到98度
縱座標是熒光強度的變化值（不是強度本身）。一開始加熱的時候，雖然熒光強度比較強，但是由於雙鏈沒有解離，所以熒光強度保持不變。當加熱接近於pcr產物tm時，雙鏈開始解離，熒光強度變小，機器會比較前後2個溫度點的熒光強度，然後把2者的差值標在圖上。
tm到達時，有一般雙鏈解離，這時的熒光強度變化最大（峰值）。再加熱，雙鏈全部解離，所以熒光強度的變化又變小了。
你pcr產物大小不一，但是只要有相同或者相近的tm，峰值就有可能在一個位置上。如果實際測得的峰值和理論計算的吻合，問題不大。如果有差別，說明有非特異性產物，建議不要再用sybr green方法。
7樓：匿名使用者
橫軸是溫度；縱軸則是熒光強度。
溶解曲線峰值在同樣的位置表示tm值相近，峰高低跟產物濃度相關，dna雙鏈多則熒光強度高。電泳出來的條帶大小也不在一條線上？到底差多少呢？
你的機器也許分辯率不夠高，溶解曲線無法區分一些差別較小的片段。
你可以把這2個產物混合到一起，專門跑一次溶解曲線，在同一個管子裡差別也許更明顯。
實時pcr的溶解曲線怎樣翻譯成英文
8樓：匿名使用者
實時pcr的溶解曲線
the real-time pcr solubility curve實時：the real-time
溶解曲線：solubility curve
怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線
9樓：匿名使用者
熒光定量pcr的溶解曲線理解：用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。
一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化，開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的。
接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
10樓：匿名使用者
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！
因為syby green染料是非特異的染料，只要有擴增，染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰，且出鋒位置是你的退火溫度，那麼這個是你的產物發出的熒光，實驗結果有效。
如果出現多鋒或退火溫度不對，那麼這個實驗結果是不可信的！你需要再次調整！
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