1樓：斛冷玉
1、page膠電泳緩衝液配置。
1）丙烯醯胺單體貯液：丙烯醯胺加上0.
45g n，n'-甲叉雙丙烯醯胺，先用40ml雙蒸水攪拌溶解，直到溶液變成透明，再用雙蒸水稀至50ml，過濾。用棕色瓶4°c儲存備用。
2)濃縮膠緩衝液貯液( tris-hcl，：
溶解在40ml雙蒸水中，用4mol/l鹽酸調。
再用雙蒸水稀至50ml。儲存在4°c備用。
3)分離膠緩衝液貯液( tris-hcl，：
溶解在80ml雙蒸水中，用4mol/l鹽酸調。
再用雙蒸水稀至100ml，儲存在4°c備用。
4)10%（ap）過硫酸銨：過硫酸銨溶入雙蒸水，使用前新鮮配製。
5)電極緩衝液( tris，甘氨酸，ph8.
3)：加上72.
07g甘氨酸，用雙蒸水稀釋到5l。可在室溫儲存一個月。
6）樣品緩衝液（ tris-hcl，：
2ml濃縮膠緩衝液貯液加上1ml87%甘油、溴酚藍，用雙蒸水稀釋至10ml，可在-20°c儲存6個月。
2、native-page配方 分離膠： 雙蒸水 30%丙烯醯胺溶液 8.
0ml tris( 5.
0ml 10%過硫酸銨溶液 (w/v) 200μl temed 15μl 濃縮膠： 雙蒸水 30%丙烯醯胺溶液 1.
7ml mol/ ltris( 1.
25ml 10%過硫酸銨溶液 (w/v) 100μl temed 10μl 3、native-page電泳。
將玻璃板、膠墊、梳子用雙蒸水洗乾淨，用酒精棉球擦拭，將電泳槽安裝好，配製分離膠(12%)和濃縮膠(5%)如表1。過硫酸銨和temed最後加入，加入後聚合即開始，應立即混勻倒入兩塊玻璃板之間。分離膠倒入兩塊玻璃板間，應該留下適合的高度，使點樣孔前端離分離膠有2.
5cm左右的距離，在膠頂部緩緩加入約高的雙蒸水，待分離膠聚合完全後，傾去上層的雙蒸水，用雙蒸水清洗凝膠頂層，用吸水紙吸去殘餘的水滴。將濃縮膠倒入玻璃板夾層，插上梳子，待濃縮膠聚合完全後，拔去梳子，立即用雙蒸水清洗點樣孔。
加入電極緩衝液，將樣品用微量進樣器點入點樣孔底部，200伏電泳。當溴酚藍到達分離膠時，電壓改為250伏，繼續電泳至溴酚藍到達凝膠底部。將凝膠剝下，浸泡在100ml的底物液中，染色1小時，待膠帶顯色後立即照相。
然後將凝膠進行常規的考馬斯亮藍染色。
變性聚丙烯醯胺凝膠電泳和非變性的有什麼區別？
2樓：網友
1、工作原理不同。
非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳或稱為活性電泳是在不加入sds和巰基乙醇等變性劑的條件下，對保持活性的蛋白質進行聚丙烯醯胺凝膠電泳，常用於酶的鑑定、同工酶分析和提純。
變性聚丙烯醯胺凝膠電泳是根據寡核苷酸的大小來分離，因此可將全長產物與不完整的短分子分開。
2、功能不同。
非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷，它們的分離是依據其電泳遷移率的不同和凝膠的分子篩作用，因而可以得到較高的解析度。
變性聚丙烯醯胺凝膠電泳的蛋白質或多肽與sds結合，經熱變性和二硫鍵的還原，形成所帶負電荷相對一致的非摺疊衍生物，其泳動速度主要由分子量決定。
3、特點不同。
非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳的過程中，蛋白質的遷移率不僅和蛋白質的等電點有關，還和蛋白質的分子量以及分子形狀有關，其中蛋白質的等電點是最重要的影響因子，要根據蛋白質的等電點來選擇對應的電泳緩衝系統。
變性聚丙烯醯胺凝膠電泳電泳時通常每一泳道至少加1mg合成的寡核苷酸，電泳後在紫外燈下定位寡核苷酸條帶，將長度正確的寡核苷酸從凝膠上切下。
3樓：匿名使用者
非變性凝膠裡面沒加變性劑，一般是sds。非變性膠跑出來的蛋白能保持其活性一般用做功能試驗，如emsa。由於沒有變性劑的原因非變性膠電泳時除了與蛋白分子量有關也會受都電荷的影響，因此對蛋白等電點的確定和緩衝液的酸鹼性有注意，有時需要倒轉電泳時的正負極。
從跑的膠來看，變性膠會比較好看，帶比較窄，非變性膠跑出來則比較粗糙。
4樓：匿名使用者
變性聚丙烯醯胺凝膠電泳（page）是根據寡核苷酸的大小來分離，可將全長產物與不完整的短分子分開。變性後的片段所帶電荷相對一致，其泳動速度只由分子量決定。
而在非變性凝膠中分離中取決於它所帶的電荷和分子量的大小兩個因素。所以變性凝膠解析度更高。
非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳的實驗器材與試劑
5樓：手機使用者
1、電泳儀、電泳槽、離心機等。
2、丙烯醯胺、tris、hcl、溴酚藍、abts等。
15%變性聚丙烯醯胺凝膠電泳的步驟
6樓：鮑亦
實驗步驟：
凝膠的製備：
1、 清洗乾淨兩塊玻璃板，晾乾後按要求裝配好垂直電泳板，兩塊玻璃板的兩側及底部用1%的瓊脂糖封邊，防止封閉不嚴而使聚丙烯醯胺液漏出。
2、 將裝好的玻璃電泳板傾斜成45～60℃角。把玻璃板在灌膠支架上固定好。
3、 分離膠：按1∶3∶8∶水=1∶2∶4∶1的比例，先將貯備液1，3和水放在一小燒杯中，過硫酸銨貯備液放在另一小燒杯中，取出將過硫酸銨溶液併入，用玻棒輕輕攪動使之混合，立即注於幹潔的玻璃板中。玻璃板垂直放置，用滴管吸取混合液，沿管壁注入，注意不要進入氣泡。
膠液注到離玻璃板口2cm處，立即在其表面覆蓋少量蒸餾水，靜置1小時左右，當見到水層下面有一清晰的介面時，則表明膠已聚合凝固，用吸水紙小心吸去上面水層。
4、 濃縮膠：按2∶4∶5∶6=1∶2∶1∶4的比例，同上法制備濃縮膠，連續平穩加入濃縮膠至離邊緣5mm處，迅速插入樣梳，靜置40分鐘。
電泳步驟：1、 拔出樣梳後，在上槽內加入緩衝液，沒過鋸齒時可拆去底端的瓊脂糖。
2、 用微量注射器距槽底三分之一處進樣，加樣前，樣品在沸水中加熱3分鐘，去掉亞穩態聚合。
3、 電泳槽中加入緩衝液，接通電源，進行電泳，開始電流恆定在10ma，當進入分離膠後改為20ma，溴酚藍距凝膠邊緣約5mm時，停止電泳。
4、 凝膠板剝離與染色：電泳結束後，撬開玻璃板，將凝膠板做好標記後放在大培養皿內，加入染色液，染色1小時左右。
5、 脫色：染色後的凝膠板用蒸餾水漂洗數次，再用脫色液脫色，直到區帶清晰。
6、 實驗結果分析。
注意事項：1、 固定玻璃板時，兩邊用力一定要均勻，防止夾壞玻璃板。
2、 凝膠配製過程要迅速， 催化劑temed要在注膠前再加入，否則凝結無法注膠。注膠過程最好一次性完成，避免產生氣泡。
3、 水封的目的是為了使分離膠上延平直，並排除氣泡。
4、 凝膠聚合好的標誌是膠與水層之間形成清晰的介面。
5、 樣梳需一次平穩插入，梳口處不得有氣泡，梳底需水平。
6、 要使鋸齒孔內的氣泡全部排出，否則會影響加樣效果。
7、 注射器不可過低，以防刺破膠體，也不可過高，在樣下沉時會發生擴散。
8、 為避免邊緣效應，最好選用中部的孔注樣。
9、 剝膠時要小心，保持膠完好無損，染色要充分。
15%變性聚丙烯醯胺凝膠電泳的步驟和原理 10
7樓：兵兵王
page：既然濃度已經決定了 那麼凝膠形成的孔徑也就固定不變了。電泳中大分子跑的慢，小分子跑得快 因此蛋白質得以分離。
步驟：還是自己查，網上和一半生化書上很多的 這裡難以說清楚。因為步驟很詳細。我不想給你貼上網頁 覺得那樣不尊重你。祝好運。
有關核酸非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳page
8樓：葉綠蛋白
有兩個可能，膠沒混勻，或者是aps不是新配的，建議用新配aps溶液試試。
非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳中，指示前沿溴酚藍為什麼不一直是直線呢
9樓：匿名使用者
1.溴酚藍跑不成直線也不會影響你目的蛋白的檢測，這個不用擔心。
2.漏膠這個問題有很多種原因，解決的話有個小方法，就是在放玻璃板之前在墊子上加點蔗糖，不要很多，但要均勻，很好用，我自從用這個方法後再沒漏過，而且不會影響你的實驗。
10樓：匿名使用者
1 我覺得也是不均勻，重新配一下，換下緩衝液。
2 凝膠溶化後冷卻一下在倒膠，膠太熱容易吧板子燙變性，我也遇到過這種情況。
我們測同工酶的時候要在裝好儀器之後用膠封住板的縫隙。
變性聚丙烯醯胺凝膠電泳點樣怎麼往上飄
11樓：匿名使用者
你加樣前先用running buffer把每個上樣孔都沖洗一遍，你用的是尿素變性膠吧，我們實驗室也跑這個膠，8m的尿素濃度太高了，很容易從膠孔析出，肉眼是看不見的，但是你上樣時，樣品會因為膠孔裡有尿素而沉不下去，這個loading buffer沒什麼關係，用2x的loading buffer如果膠孔處理乾淨了樣品也不會飄的。
12樓：匿名使用者
分離核酸的膠是瓊脂糖膠吧？sds-page膠不是用來分離蛋白質的嗎？6*loading buffer 5ul,pcr產物10ul，那loading buffer加個2微升不就行了？
還有液體密度，sds-page膠是浸沒在sds溶液中的，瓊脂糖膠是浸沒在tae中的，密度不一樣當然會出問題，你再搞搞清楚？
13樓：匿名使用者
沉降不夠，不知道這個loading buffer的配方是什麼？做page膠分離，loading的配方要能夠幫助樣品沉降。
聚丙烯醯胺用途是什么，聚丙烯醯胺用途是什麼？
聚丙烯醯胺聚丙烯醯胺 pam 是一種線型水溶性高分子，是水溶性高分子化合物中應用最為廣泛的品種之一，pam及其衍生物可以用作高效的絮凝劑 增稠劑 紙張增強劑以及液體的減阻劑，廣泛應用於水處理 造紙 石油 煤炭 礦冶 地質 輕紡 建築等工業部門。非離子聚丙烯醯胺 用途 汙水處理劑 當懸浮性汙水顯酸性時...
聚丙烯醯胺S725是什麼意思啊，聚丙烯醯胺用途是什麼？
聚丙烯醯胺 polyacrylamide 簡稱pam，由丙烯醯胺單體聚合而成，是一種水溶性線型高分子物質。單體丙烯醯胺化學性質非常活潑，在雙鍵及醯胺基處可進行一系列的化學反應，採用不同的工藝，匯入不同的官能基團，可以得到不同電荷產品 陰離子 陽離子 非離子 兩性離子聚丙烯醯胺。pam的平均分子量從數...
如何配聚丙烯醯胺溶液
你肯定是加聚丙烯醯胺加的太快了。1.配製時先開啟攪拌，攪拌的速度不能過快 防止打斷聚丙烯醯胺的分子鏈，以燒杯中剛出現漩渦為宜 2.將聚丙烯醯胺緩慢加入燒杯中，一定要慢，可以加入一點，待其溶解後在加入一點。3.加入完成後，根據濃度的不同攪拌30min到2h不等。用量多而且需要各種不同濃度的可以配高濃度...