elisa法檢測抗原的雙抗體夾心法的一些困惑

時間 2021-08-30 10:57:59

1樓:百浩生物

不直接標記一抗而標記二抗,這是從生產成本上考慮的。二抗大部分是通用的,標記一次可以大量標記,比如10ml或者更多的濃縮液,可以生產上千上萬的試劑盒。一次檢測就行了

而一抗種類很多,量少,如果標記一抗,比較費事。次次得檢測(標記完得檢測)。hrp標記不是很簡單的事

科研用的試劑盒。單品銷售量很小的,不值當。

但臨床上的elisa試劑盒是直接標記在一抗上的,他們量大。這樣也用著簡單。

還有一個,科研試劑盒也不一定用的酶標二抗,有的是生物素放大系統,這樣提離靈敏度。

2樓:匿名使用者

雙抗體夾心法原理:固相載體上包被抗體,再加入待測抗原(可以是血清或者其它樣本),洗板(洗掉非特異性吸附),再加入酶標抗體,再洗板(洗掉非特異性吸附),再加底物顯色。

這裡有幾點需要注意:①抗原是大分子抗原,具有2個以上的抗原表位;②包被抗體和酶標記的抗體都是針對抗原的特異性抗體,只不過它們分別針對的是不同抗原表位,經常被稱作一抗和二抗;③酶是催化底物顯色的,起到一個訊號放大作用。

3樓:乾令颯

有一抗標記生物素的。但如樓上說的,在二抗上加更商業化。固相載體是必要的,方便洗去雜質。

可以使用fret(熒光)技術、噬菌體展示、核糖體展示等觀察抗體抗原互作,但這都是科研上用的,elisa或其試劑盒在實用的檢測更直觀具體,且可以定量。方法相通,但具體細節決定一切。方法不同決定檢測準確度,這是由於與抗體結合的抗原決定簇是唯一的,不同的具有相同的結構域的抗原能與同類抗體結合,所以需要不同的結合部位的特異抗體去二次多次篩選。

4樓:匿名使用者

我也問過這個問題。聽別人給我解釋,說可以直接標記在一抗上然後加底物顯色,但是那樣的話,放大效果沒有加二抗的好。

elisa雙抗體夾心法原理是什麼?

5樓:荼樓

原理

lisa 的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。

用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與液體中的其他物質分開。加入酶標記的抗原或抗體,通過反應也結合在固相載體上。加入酶反應的底物後,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,根據呈色的深淺進行定性或定量分析。

酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。

特點

某些分泌型蛋白,用sirna 干擾後可以用elisa 進行檢測。

elisa法酶聯免疫吸附實驗(elisa) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術。該技術可用於檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡便、載體易於標準化等優點。

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