1樓：匿名使用者
做pcr時，最抑悶的一件事就是花了三個多小時，一點兒結果都沒有。以前做的時候，我也遇到這增的問題！所有的反應液和底物加好了，機器設好了，跑吧，跑完pcr了，好的，再來跑電泳檢測，結果，白花花一大片，什麼都沒有，那一刻，覺得自己好失敗，別人的什麼有，自己的什麼都見不到，真想把機器給砸了。
後來不斷的調整taq酶的濃度，當然是增加了，有了一點兒效果，但是，還是不理想，再調整（降低）底物（dna）的濃度，還是不行，再調整（稀釋到50倍），再做一次，有了，很是漂亮而又清晰的pcr產物的條帶！ 那一刻，真是太高興了！緊接著，又做了一次，所有的樣品都有pcr產物了。
總結一下，就是dna的問題，它的濃度太高，而且在提取dna時如果不純，那麼裡的雜質就會太多，只有通過稀釋dna（同時也是稀釋雜質），才能使dna在樣品裡的濃度和雜質濃度的比值無限大，在這樣的條件下，只要有足夠的酶，那麼，反應就能正常進行，得到預期的產物。因為，如果雜交的濃度過大，酶的活性就會受到抑制。
因此，我的建議是：第一，稀釋底物濃度，分兩個梯度（25倍，50倍）；
第二，加大酶的濃度（1.5或2u）。
以上是在25ul反應體系下的建議
2樓：藍雨杏
可能**時dna提取不好。建議dna提取完了以後再去跑膠檢測的，測定dna提取的效果和濃度。然後做pcr。
3樓：匿名使用者
會不會是沒有擴增成功，od顯示的是單核苷酸的濃度
4樓：
模板或者引物的問題拉
5樓：匿名使用者
pcr失敗了,可能是引物,pcr程式的問題.
6樓：匿名使用者
pcr失敗唄！pcr失敗的原因有很多可能了，自己找吧。
pcr的產物跑瓊脂糖凝膠電泳時，所有樣都不出現條帶，而是彌散狀的，從投拖到尾
7樓：匿名使用者
“從頭拖到尾，另外一對引物就能做出來”
說明不是引物之間形成二聚體，而是第一對引物的設計有問題（特異性很差）。如果一定要擴增那個區，建議引物的位置向兩邊放一放。如果你沒有好的設計軟體，建議到primer3去試試（目前最好的免費引物設計）。
如果還是不行，把序列發給我，我幫你設計（我有專業軟體，abi primer express 3 和 invitrogen vector nti 10)
8樓：浙大阿米巴
看不懂廢話毛
說明你的引物不是一般的差。第一步是提高退火溫度試試，還是不行就只能按照一樓說的重新設計。
9樓：軒轅頑童
引物設計問題，引物特意性差，3‘端gc比太高，或者有引物落入了串聯重複序列中。建議做一下primer－blast看一下是什麼問題，然後重新設計
10樓：匿名使用者
可能就是引物特異性的問題，到網上再重新設計一個吧
求問dna pcr跑膠**中的不明顯條帶是什麼，為什麼會出現這些條帶？如下圖
11樓：匿名使用者
非特異性擴增產物。應該優化pcr反應，比如提高退火溫度（首選）、減少酶量（首選）、降低鎂離子濃度、降低模板濃度、降低引物濃度等等。如果不行，還可以重新設計引物，增強引物的特異性。
1300bppcr產物跑膠條帶只有750左右,但是測序結果出來卻又是1300bp,請問是怎麼回事??
12樓：匡雅霜
正常，marker不太準。以測序結果為準。
不過750和1300差得有點多啊，你跑膠是不是沒怎麼分開啊？
而且有時候dna二級結構也會影響到跑膠結果。
13樓：
pcr跑膠的影響因素也很多的，是不是tea buffer的問題呢？或者是marker的問題，可以做下對照實驗驗證下。
測序結果出來的結果肯定是最準確的
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