1樓:頹小廢
對,它不表達自身質粒,因為培養基裡有抗生素,只有
攜帶抗生素基因的質粒(也就是專我們轉化到感受態裡的
屬質粒)才能表達,所以長出來的全都是含抗生素基因質粒的菌。所以提取出來的質粒肯定全都是我們轉入要克隆的重組質粒。
2樓:艾康生物
你好!dh5α感受
bai態細胞是常用的細菌du
質粒擴增zhi提取細菌,其本身dao是含有質粒的。普通的大腸桿菌回細胞答內有一種「免疫」機制,即當外源dna 侵入時,會產生酶類將外源dna切除,無法進行復制增殖。而其自身質粒的基因組被修飾(如甲基化)所以不被限制酶識別,不會被剪下。
dh5α菌株是一種經誘變的菌株,其基本特性是:缺乏自身dna 修飾,缺乏「免疫」機制,不會對匯入的外源dna切割,並對氨苄青黴素敏感。因此dh5α用於質粒擴增時候,其自身的質粒不會被擴增,而外援質粒同樣不會被切割,因此可以用於基因工程。
trans5α和dh5α感受態細胞是一樣的嗎
3樓:阿魯巴星人
菌種是一樣的,就是改了個名字
4樓:小妖在別處
trans5α是全式金公司的感受態dh5α,就是普通的感受態dh5α,用起來一般沒什麼問題
感受態細胞dh5a是什麼
5樓:琴葉紫菀
dh5a是大腸桿菌的一種菌株。
dh5a的感受態是指細胞經過一些特殊方法(電擊法、cacl2法等處理後,細胞膜的通透性發生了暫時性的改變,成為能允許外源dna分子進入的細胞,即感
受態細胞(compenent cells)
6樓:匿名使用者
一般都是用於轉化進外源質粒載體,然後擴增該質粒的。
製備感受態細胞的關鍵是什麼
7樓:anyway丶
製備感受態細胞的關鍵是將外源dna分子引入受體細菌,使之獲得新的遺傳性狀。
主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大,直觀的說,使得細胞膜表面出現一些孔洞,便於外源基因或載體進入感受態細胞。由於細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修復。將構建好的載體轉入感受態細胞進行表達,不僅可以檢驗重組載體是否構建成功,最主要的是感受態細胞作為重組載體的宿主可以進行後續實驗,如蛋白質表達純化等工作。
擴充套件資料
製作方法
cacl2法
1.將快速生長的大腸桿菌置於經低溫(0℃)預處理的低滲氯化鈣溶液中,便會造成細胞膨脹,同時ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構,促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來,離開所在區域,誘導細胞成為感受態細胞
細胞膜通透性發生變化,極易與外源dna相粘附並在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基-磷酸鈣複合物。
聯合其它的二價金屬離子(如mn、co)、dmso或還原劑等物質處理細菌,則可使轉化率提高100~1000倍。
2.此時,將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激(90s),細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動,並隨機出現許多間隙,外源dna就可能被細胞吸收。進入細胞的外源dna分子通過複製、表達,實現遺傳資訊的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3.將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養,篩選出帶有外源dna分子的陽性克隆。
電轉法電擊法不需要預先誘導細菌的感受態,依靠短暫的電擊,促使dna進入細菌,轉化率最高能達到109~1010轉化子/ug閉環dna。
8樓:匿名使用者
儘量使細胞保持在低溫下,可冰浴,這樣可降低細胞代謝率,防治細胞的大量死亡。因為無培養基,代謝強,則會引起大量細胞死亡。
9樓:浙大阿米巴
熱激的時間和操作速度掌握好
慢病毒載體可以使用dh5α感受態細胞嗎
10樓:匡雅霜
不好意思,之前弄錯了,可以的。
慢病毒載體可以重組,所以要選用重組缺陷的菌。dh5α或jm109,xl1-blue菌株為重組缺陷性菌株,可穩定擴增已鑑定的重組質粒。
11樓:鴻飛
4個 質粒 分開 就像正常的 質粒一樣,轉化,擴增,提質粒 ,用大提 ,去內毒素的,沒有問題,我做過,另外,這位仁兄, 我想請教一下,你的 表達質粒 是否用的是 可以做 shrna 的,載體,我qq 413201048 ,我們可以交流一下
dh5α感受態細胞和jm109的區別是什麼