1樓：小情緒小沒誒
要看你是用哪種方法提取了，用試劑盒如凱傑，biog，天根都有詳細說明書可以參考，試劑盒方便，產率也高，如果用其他方法要注意：
1、 裂解液要預熱,以抑制dnase,加速蛋白變性,促進dna溶解.
2、 酚一定要鹼平衡.苯酚具有高度腐蝕性,飛濺到**、粘膜和眼睛會造成損傷,因此應注意防護.氯仿易燃、易爆、易揮發,具有神經毒作用,操作時應注意防護.
3、 各操作步驟要輕柔,儘量減少dna的人為降解.
4、 取各上清時,不應貪多,以防非核酸類成分干擾.
5、 異丙醇,乙醇.naac,kac等要預冷,以減少dna的降解,促進dna與蛋白等的分相及dna沉澱.
6、 提取dna過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤乾等辦法進行無核酸酶化處理.
7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製.
dna提取過程中的關鍵步驟及注意事項有哪些
2樓：許建設扈錦
dna的粗提取
①準備材料
將新鮮菜花和體積分數為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24
h。②取材
稱取30
g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨將碎菜花放入研缽中,倒入10
ml研磨液,充分研磨10
min。
④過濾在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液濾入燒杯中(有條件的學校可將濾液倒入塑料離心管中進行離心,用1
000r/min的旋轉頻率,離心25
min,取上清液放入燒杯中)。在4
℃冰箱中放置幾分後,再取上清液。
⑤加冷酒精
將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數為95%的冷酒精溶液中,並用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液(玻璃棒不要直插燒杯底部)。沉澱35
min後,可見白色的dna絮狀物出現。用玻璃棒緩緩旋轉,絮狀物會纏在玻璃棒上。
(2)dna的鑑定
①配製二苯胺試劑
取0.1
mlb液,滴入到10
mla液中,混勻。
②鑑定取4
mldna提取液放入試管中,加入4
ml二苯胺試劑,混勻後觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100
℃)加熱10
min。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色)。
研磨液的配製方法
tris：10.1
g(相對分子質量為121.14),先加50
ml蒸餾水溶解,用物質的量濃度為2
mol/l
的鹽酸調至ph8.0,再加下述藥品。
nacl：8.76
g(相對分子質量58.44)
edta：37.2
g(相對分子質量372.24)
sds：20
g(相對分子質量288.3)
待上述藥品全部溶解後,再用蒸餾水定容至1
000ml。
若在室溫低於20
℃時配製藥液,sds呈沉澱析出,此時需要加溫,才能將sds溶解。如果提前配製的研磨液出現了沉澱,則應加溫使沉澱溶解後再使用。
研磨液中幾種藥品的作用
sds(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質變性,與dna分離。
edta(乙二胺四乙酸二鈉):為dna酶的抑制劑,可以防止細胞破碎後dna酶降解dna。
物質的量濃度為0.15
mol/l的氯化鈉溶液：能很好地溶解dna。
tris/hcl：提供緩衝體系,dna在這個緩衝體系中呈穩定狀態。(tris為三羥甲基氨基甲烷)
鑑定dna的其他方法
用紫外燈照射法鑑定dna效果很好。具體鑑定方法如下。
1.配製染色劑。用蒸餾水配製萬分之五的溴化乙錠(eb)溶液。
2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹於蠟紙上,再滴1滴eb溶液染色。
3.將蠟紙放在紫外燈(260
nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的螢光(dna的紫外吸收高峰在280
nm處)。
o(∩_∩)o~
3樓：愛玩評測
這個太專業了，你最好問一下專業人士。
4樓：小乖乖小鬧鬧
可以用biog提取方法如下
1. 請自行準備：無水乙醇、1.5ml離心管。
2. 取出析出液和洗滌液，按以下操作：
a) 析出液：21ml加入9ml無水乙醇；42ml加入18ml無水乙醇。
b) 洗滌液：9ml加入21ml無水乙醇；18ml加入42ml無水乙醇。
c) 配製好的洗滌液如出現沉澱，可在37℃溶解，搖勻後使用。
3. 取10-20mg左右的組織，用液氮研磨為粉末，轉入1.5ml 離心管內，加入100 μl 生理鹽水（或直接在100 μl 生理鹽水中將組織勻漿為細胞懸液），振盪15秒；加入200 μl 裂解液， 20μl消化液a，振盪混勻，室溫放置5分鐘。
4. 加入20 μl 消化液b，充分混勻；56℃水浴60分鐘至組織完全消化，5000rpm離心5分鐘，將上清吸至1.5ml 離心管。
5. 加入200μl無水乙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響dna的提取與後續實驗。
6. 將吸附柱放入收集管內，將上述溶液轉入吸附柱內，靜置2 分鐘，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內廢液。
7. 將吸附柱放**集管內，加500μl 洗滌液a至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內廢液。
8. 將吸附柱放**集管內，加500μl 洗滌液b至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內廢液。
9. 將吸附柱放**集管內，12,000 rpm 4℃離心2 分鐘，離去殘留的洗滌液。
dna提取過程中的關鍵步驟及注意事項有哪些
5樓：周洋
1、 裂解液要預熱,以抑制dnase,加速蛋白變性,促進dna溶解.
2、 酚一定要鹼平衡.苯酚具有高度腐蝕性,飛濺到**、粘膜和眼睛會造成損傷,因此應注意防護.氯仿易燃、易爆、易揮發,具有神經毒作用,操作時應注意防護.
3、 各操作步驟要輕柔,儘量減少dna的人為降解.
4、 取各上清時,不應貪多,以防非核酸類成分干擾.
5、 異丙醇,乙醇.naac,kac等要預冷,以減少dna的降解,促進dna與蛋白等的分相及dna沉澱.
6、 提取dna過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤乾等辦法進行無核酸酶化處理.
7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製.
6樓：雙槍老椰子
dna的粗提取
①準備材料 將新鮮菜花和體積分數為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室,至少24 h。
②取材 稱取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 將碎菜花放入研缽中,倒入10 ml研磨液,充分研磨10 min 。
④過濾 在漏斗中墊上尼龍紗布,將菜花研磨液濾入燒杯中(有條件的學校可將濾液倒入塑料離心管中進行離心,用1 000r/min的旋轉頻率,離心25 min,取上清液放入燒杯中)。在4 ℃冰箱中放置幾分後,再取上清液。
⑤加冷酒精 將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分數為95%的冷酒精溶液中,並用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液(玻璃棒不要直插燒杯底部)。沉澱35 min後,可見白色的dna絮狀物出現。用玻璃棒緩緩旋轉,絮狀物會纏在玻璃棒上。
(2)dna的鑑定
①配製二苯胺試劑 取0.1 ml b液,滴入到10 ml a液中,混勻。
②鑑定 取4 ml dna提取液放入試管中,加入4 ml 二苯胺試劑,混勻後觀察溶液顏色(不變藍)。用沸水浴(100 ℃)加熱10 min 。在加熱過程中,隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現淺藍色)。
研磨液的配製方法
tris：10.1 g(相對分子質量為121.14),先加50 ml 蒸餾水溶解,用物質的量濃度為2 mol/l 的鹽酸調至ph8.0,再加下述藥品。
nacl：8.76 g(相對分子質量58.44)
edta：37.2 g(相對分子質量372.24)
sds：20 g(相對分子質量288.3)
待上述藥品全部溶解後,再用蒸餾水定容至1 000 ml。
若在室溫低於20 ℃時配製藥液,sds呈沉澱析出,此時需要加溫,才能將sds溶解。如果提前配製的研磨液出現了沉澱,則應加溫使沉澱溶解後再使用。
研磨液中幾種藥品的作用
sds(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質變性,與dna分離。
edta(乙二胺四乙酸二鈉):為dna酶的抑制劑,可以防止細胞破碎後dna酶降解dna。
物質的量濃度為0.15 mol/l的氯化鈉溶液：能很好地溶解dna。
tris/hcl：提供緩衝體系,dna在這個緩衝體系中呈穩定狀態。(tris為三羥甲基氨基甲烷)
鑑定dna的其他方法 用紫外燈照射法鑑定dna效果很好。具體鑑定方法如下。
1.配製染色劑。用蒸餾水配製萬分之五的溴化乙錠(eb)溶液。
2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹於蠟紙上,再滴1滴eb溶液染色。
3.將蠟紙放在紫外燈(260 nm)下照射(暗室中),可見橙紅色的螢光(dna的紫外吸收高峰在280 nm處)。
在基因組dna的提取過程中應注意哪些問題
7樓：匿名使用者
1、 裂解液要預熱,以抑制dnase,加速蛋白變性,促進dna溶解.
2、 酚一定要鹼平衡.苯酚具有高度腐蝕性,飛濺到**、粘膜和眼睛會造成損傷,因此應注意防護.氯仿易燃、易爆、易揮發,具有神經毒作用,操作時應注意防護.
3、 各操作步驟要輕柔,儘量減少dna的人為降解.
4、 取各上清時,不應貪多,以防非核酸類成分干擾.
5、 異丙醇,乙醇.naac,kac等要預冷,以減少dna的降解,促進dna與蛋白等的分相及dna沉澱.
6、 提取dna過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤乾等辦法進行無核酸酶化處理.
7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製.
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